超順磁性氧化鐵與熒光染料聯合標記骨髓間充質干細胞及生物學特性檢測.pdf

1、目的:骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)已經成為組織工程中重要的的種子細胞,在多種疾病的臨床治療中具有廣闊的應用前景。而若想深入研究BMSCs的存活、增殖、分化及在體內的遷移、歸巢情況,首先需要解決如何高效、安全地標記BMSCs的問題。本文通過觀察SPIO、DAPI和CM-Dil對家兔BMSCs的聯合標記效果及其對細胞存活、增殖以及分化的影響,為BMSCs的活體示蹤研究奠

2、定理論及實驗基礎。
　　 方法:分離培養(yǎng)家兔骨髓間充質干細胞,用SPIO、DAPI和CM-Dil聯合標記后,采用普魯士藍染色法檢測SPIO標記率,熒光顯微鏡檢測熒光標記率,透射電子顯微鏡觀察細胞的超微結構及SPIO在細胞內的分布,臺盼藍拒染法檢測細胞活力,MTT法檢測細胞增殖力,并使用地塞米松、胰島素、3-異丁基一1一甲基黃嘌呤、吲哚美辛體外誘導標記細胞向脂肪細胞分化并用透射電子顯微鏡鑒定誘導后細胞,使用5一氮雜胞苷體外誘導標記

3、細胞向心肌細胞分化并用免疫熒光鑒定誘導后細胞。
　　 結果:SPIO、DAPI和CM-Dil在體外對家兔BMSCs的聯合標記率幾乎達100％;透射電鏡下可見電子密度高的SPIO顆粒主要分布于溶酶體、線粒體內部及胞內其他膜性結構上,細胞核內未見分布,且聯合標記BMSCs的超微結構顯示清晰、形態(tài)保存良好;臺盼藍拒染法顯示聯合標記BMSCs組的細胞活力與未標記BMSCs組相比差異無統計學意義(P＞0.05);MTT法檢測發(fā)現聯合標記B