EB病毒BARF1及其變異型基因改變鼻咽癌細胞生物學(xué)行為機制的初步研究.pdf

1、背景和目的：EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）編碼早期基因BARF1具有轉(zhuǎn)化作用，在多數(shù)鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）組織中表達，可能在NPC發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)BARF1及其變異型基因過表達均提高了EBV陰性細胞系CNE的增殖和抗凋亡能力。本研究旨在進一步探討B(tài)ARF1基因及其變異型對NPC細胞系HONE1生物學(xué)行為的影響及機制，為最終闡明BARF1參與NPC的

2、致癌機制提供依據(jù)。
　　方法：以B95-8型和V29A變異型BARF1基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HONE1細胞及對照細胞為研究對象，進行MTT實驗、平板克隆形成實驗、凋亡誘導(dǎo)實驗、細胞遷移侵襲實驗和裸鼠致瘤實驗，檢測BARF1原型和變異型基因?qū)ONE1細胞生物學(xué)行為的影響；并采用表達譜芯片檢測和篩選BARF1基因轉(zhuǎn)染前后差異表達基因，對差異表達基因進行功能注釋和生物反應(yīng)通路分析，繪制差異基因相互作用蛋白網(wǎng)絡(luò)圖，找出差異倍數(shù)大的關(guān)鍵節(jié)點基因，選

3、擇與細胞增殖、凋亡和遷移相關(guān)通路，在BARF1轉(zhuǎn)染細胞及裸鼠瘤組織中用real-time PCR進行表達驗證。
　　結(jié)果：（1）細胞生物學(xué)實驗：與對照細胞比較，BARF1原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細胞MTT吸光度值和平板克隆形成率增高（P均小于0.05）；順鉑誘導(dǎo)凋亡后細胞存活率提高，而細胞凋亡率降低（P均小于0.05）；細胞遷移和侵襲能力提高（P均小于0.05）。BARF1原型和變異型基因轉(zhuǎn)染細胞之間細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲均無顯著

4、性差異。（2）裸鼠致瘤實驗：與對照細胞比較，BARF1變異型基因轉(zhuǎn)染細胞裸鼠致瘤能力無明顯提高。（3）基因芯片分析：聚類分析顯示B95-8型和V29A變異型細胞聚類在同一簇中，與對照細胞比較，共同差異基因317條，其中上調(diào)94條，下調(diào)223條。功能注釋和KEGG分析發(fā)現(xiàn)多條差異基因與細胞粘附、細胞增殖、細胞凋亡和細胞遷移侵襲等生物學(xué)過程有關(guān)，參與細胞因子受體相互作用通路、細胞粘附分子通路、ErbB信號傳導(dǎo)途徑通路和癌癥通路等。(4)通路

5、挑選及驗證：Real-time PCR顯示，與對照細胞比較，BARF1基因轉(zhuǎn)染細胞中CDH1、TP63、MIR205HG、GJA1和S100A2表達下調(diào)，ZEB2表達上調(diào)，與芯片結(jié)果一致；BARF1基因轉(zhuǎn)染細胞形成裸鼠瘤組織中上述基因檢測結(jié)果與轉(zhuǎn)染細胞中一致。
　　結(jié)論：（1）BARF1原型和V29A變異型基因均可促進NPC細胞系HONE1增殖、提高其抗凋亡能力和遷移侵襲能力，從而增強HONE1細胞腫瘤原性，V29A變異不影響其致