喉鱗狀細胞癌中EphB4基因突變與表達的研究.pdf

1、喉鱗狀細胞癌(Laryngeal Squamous Cell Carcinoma，LSCC，喉癌)是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，是僅次于肺癌第二位的呼吸道高發(fā)腫瘤。在我國，東北地區(qū)是喉癌的高發(fā)區(qū)域，過去的10年中，我國喉癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢。喉癌對放療及化療均不敏感，手術是目前主要的治療手段，但手術具有不小的損傷性，術后患者的生存率和生活質量均不理想。因此實現(xiàn)對喉癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷，并在基因水平尋找新的治療手段成為當前急需解決的問

2、題。 惡性腫瘤的形成和轉移是多基因、多因子共同作用的結果，涉及到多種癌基因的激活和抑癌基因的失活。腫瘤的發(fā)生及發(fā)展還與血管的形成有著密切的聯(lián)系，目前已知有多種血管生成因子參與腫瘤血管形成。最近的一系列報道顯示，產促紅細胞生成素的肝細胞受體(Erythropoietin Producing Hepatocelluar receptor,Eph)在腫瘤血管的生成中起著關鍵性的作用。Eph作為酪氨酸激酶受體家族中最大的一個亞家族，目前

3、已確認的Eph家族成員共14個，根據(jù)結構同源性和結合特性分為A、B兩個亞型，Eph的14個成員中，EphB4及其配體EphrinB2在腫瘤發(fā)生和演進中的作用已受到廣泛的關注。 材料與方法： 1.實驗材料：40例標本來源于中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院耳鼻喉科患者手術切取標本。病理結果證實均為喉鱗狀細胞癌，術前未經化療和放療。 2.實驗方法：RT-PCR方法以癌旁組織為參照分析喉癌組織中EphB4基因mRNA的表達情況，

4、Western blot方法分析EphB4蛋白質在喉癌組織中的表達情況，使用半定量PCR的方法檢測腫瘤組織中該基因的擴增情況，PCR-LIS-SSCP技術結合DNA測序篩查了EphB4基因第13、14外顯子(此區(qū)域編碼蛋白質的酪氨酸激酶結構域)的突變情況。 結果： 1.RT-PCR結果表明，40例配對標本，所有的癌組織中均有EphB4基因的表達，而在癌旁正常組織中僅呈現(xiàn)低表達或無表達。40例癌組織ZphB4基因mRNA表

5、達/β-actin表達的平均密度值比值為0.738±0.137，癌旁正常組織為0.450±0.173，40例配對標本中，29例癌組織EphB4基因mRNA表達高于癌旁正常組織，占72.5％(29/40)。經統(tǒng)計學分析，腫瘤組與對照組差異顯著(t=7.77，P<0.01)。 2.Western blot結果表明，40例配對標本，所有的癌組織中均可見EphB4，蛋白質的表達，而在癌旁正常組織中僅呈現(xiàn)低表達或無表達,癌組織EphB4蛋

6、白質表達/β-actin表達的平均密度比值為0.757±0.174，癌旁正常組織EphB4蛋白質表達/β-actin表達的平均密度值為0.509±0.168，40例配對標本中，25例癌組織EphB4蛋白質表達高于配對的癌旁正常組織，占62.5％(25/40)。經統(tǒng)計學分析，腫瘤組與對照組差異顯著(t=5.99，P<0.01)。 3.對40例樣本的ZPhB4基因13、14號外顯子突變篩查，僅有兩例出現(xiàn)了泳動變位，通過DNA雙向測序

7、，未發(fā)現(xiàn)有堿基的改變。 4.PCR結果顯示，40例腫瘤組織中未發(fā)現(xiàn)EphB4基因的擴增。 結論： 1.已檢測的40對樣本中未發(fā)現(xiàn)EphB4的擴增。 2.篩查40對樣本，EphB4基因的13、14號外顯子中也未發(fā)現(xiàn)突變。 3.喉癌組織中EphB4的mRNA和蛋白質表達水平均明顯高于癌旁正常組織，且其高表達與腫瘤的臨床分期、腫瘤直徑的大小以及是否存在淋巴結轉移密切相關。 4.EphB4的mRN