細胞內表達海洋來源的UPL1-AJL1-HdSABL基因抗腫瘤作用的機制研究.pdf

1、浙江理工大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中己明確注明和引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內容負責，并完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：揚施羲日期：加￥年7月孑日摘要癌癥是威脅人類健康的主要疾病之一。與正常細胞相比，癌細胞內很多蛋白的糖

2、基化發(fā)生改變。凝集素是一種糖類識別蛋白，可以特異性識別并結合特定的糖蛋白或糖脂，并通過糖類復合物調節(jié)細胞的生長、分化、信號傳遞、細胞遷移、凋亡、免疫調節(jié)等生物過程，已被應用于免疫學、腫瘤和細胞生物學等諸多方面的研究。之前，本課題組將掌葉半夏凝集素(Pinelliapedatisectaagglutinin，PPA)基因轉入癌癥細胞，發(fā)現(xiàn)PPA可與蛋白精氨酸甲基轉移酶5(proteinargininemethyltransferase5，

3、PRMT5)結合，最終進入細胞核導致腫瘤細胞死亡。研究提示凝集素超家族中可能蘊藏抗癌基因。海洋凝集素種類繁多，可識別各種糖類，本文中選取海洋生物孔石莼(Uivapertusa)N一乙酰葡糖胺凝集素UPL1、盤鮑魚(Haliotisdiscusdiscus)唾液酸凝集素HdSABL以及日本鰻魚叫nguillajaponica)半乳糖凝集素AJLI，將基因導入腫瘤細胞，在細胞水平上研究它們的毒性及機制。一將彳兒J、HdSABL、卿三J基因克

4、隆到真核載體pEGFPC1中，觀察其蛋白在惡性腫瘤細胞內的亞細胞定位，并構建攜帶A兕J、HdSABL、UPLl基因的復制缺陷型腺病毒(ADFLAGAJLl，ADFLAGHdSABL及ADFLAG—UPL)與對照病毒AD—F翻G，并在體外測定其對多種癌細胞的殺傷效果，探索其在細胞內的抑癌作用機理。本論文研究可為癌癥基因治療提供新的治療基因。方法(1)構建pEGFPGENEC1系列真核表達載體：(2)熒光顯微鏡觀察，篩選對癌細胞有毒性的凝集