云芝糖肽(PSP)誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞凋亡過(guò)程中對(duì)TNFR1死亡受體通路調(diào)控的研究.pdf

1、云芝糖肽(PSP)是從中藥云芝(Trametes versicolor)COV-1菌株菌絲體內(nèi)提取的成分。作為國(guó)家Ⅱ類新藥，PSP被用于癌癥病人減輕化療放療產(chǎn)生的毒副作用。體外研究證明PSP可以誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞Mol-4發(fā)生凋亡現(xiàn)象。本課題就云芝糖肽(PSP)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞Molt-4凋亡過(guò)程中對(duì)TNFR1死亡受體途徑的調(diào)控作用進(jìn)行研究。
　　 使用透射電鏡觀察400μg/mlPSP誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征，發(fā)現(xiàn)有染

2、色質(zhì)凝聚，細(xì)胞皺縮、凋亡小體形成及釋放等典型的凋亡特征。流式細(xì)胞儀分析25、100、400μg/mlPSP作用Molt-4細(xì)胞48h，均能夠上調(diào)死亡受體TNFR1陽(yáng)性細(xì)胞比率(PG)，分別增加0.32％、4.08％、11.27％；用400μg/mlPSP作用12、24、36、48h后也均能夠上調(diào)PG，分別增加5.71％、36.48％、37.25％、40.88％。加入2.5μg/100μl抗TNFR1抗體可減少16％因PSP誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡

3、。ELISA檢測(cè)顯示死亡配體TNF-α濃度并未受PSP調(diào)控。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)表明PSP可以促進(jìn)TRADD蛋白與死亡受體TNFR1結(jié)合，形成凋亡復(fù)合物。免疫熒光標(biāo)記發(fā)現(xiàn)PSP能夠促使FADD聚集至細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)。這些現(xiàn)象均顯示PSP是通過(guò)上調(diào)TNFR1死亡受體的表達(dá)量，募集胞內(nèi)TRADD、FADD蛋白，從而使死亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)部，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。免疫印跡進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，Bid分子并未受到PSP調(diào)控，提示PSP調(diào)控的TNFR1死亡受體途徑并未通過(guò)Bid