衰老大鼠模型的建立及增齡對(duì)大鼠腸黏膜上皮屏障的影響.pdf

1、本文從以下幾個(gè)方面進(jìn)行論述。
　　第一部分 衰老大鼠模型的建立
　　目的：本實(shí)驗(yàn)采用國(guó)內(nèi)最常用的建立衰老動(dòng)物模型方法，即通過(guò)對(duì)SD大鼠采取D-半乳糖連續(xù)皮下注射的方法建立衰老大鼠模型，并對(duì)其相關(guān)的衰老指標(biāo)進(jìn)行初步分析與評(píng)價(jià)，來(lái)觀察大鼠在衰老過(guò)程中體重、衰老指標(biāo)如超氧化物歧化酶(supemxide dismutate， SOD)、丙二醛(malondiadehycle， MDA)等方面的變化。同時(shí)利用該衰老大鼠模型，對(duì)后續(xù)研究

2、提供衰老實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
　　方法：(1)選取3月齡SD大鼠10只（A組）、12月齡SD大鼠10只(B組)、24月齡衰老模型SD大鼠10只（C組），其中24月齡衰老模型大鼠由3月齡SD大鼠予D-gal按0.125g· kg-1·d-1劑量皮下連續(xù)注射40d的方法建立。各組均常規(guī)攝食和飲水飼養(yǎng)40d，飼養(yǎng)期間每10天測(cè)量各組大鼠體重變化，飼養(yǎng)40d后測(cè)量各組大鼠血清SOD活力、MDA含量;取大鼠胸腺、脾臟稱重，計(jì)算胸腺、脾臟指數(shù)。

3、　　(2)比較3月齡組（A組）、12月齡組（B組）和24月齡衰老模型組(C組)間體重、血清SOD活力、MDA含量、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的差異。
　　結(jié)果：(1)常規(guī)飲食飼養(yǎng)40d后，24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）與3月齡大鼠（A組）相比，體重增長(zhǎng)均減慢[24月齡(41.3±11.1)g，12月齡(85.6±10.9)g，3月齡(125.3±15.2)g，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠體重增長(zhǎng)較12月齡亦減慢(

4、P＜0.05)。
　　(2)24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）與3月齡大鼠(A組)相比，血清SOD活力下降[24月齡(50.48±10.12)U/m1，12月齡(58.40±5.57)U/ml，3月齡(66.38±5.39) U/ml，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠血清SOD活力較12月齡亦下降(P＜0.05)。
　　(3)24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）與3月齡大鼠(A組)相比，血清MD

5、A含量增加[24月齡(11.83±3.13)nmol/ml，12月齡(8.41±2.04) nmol/ml，3月齡(4.81±1.37)nmol/ml，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠血清MDA含量較12月齡亦增加(P＜0.05)。
　　(4)24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）與3月齡大鼠(A組)相比，胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均降低[胸腺指數(shù):24月齡(0.089±0.006)g/100g，12月齡(0.107±0.0

6、05)g/100g，3月齡(0.230±0.011)g/100g，P＜0.05;脾臟指數(shù):24月齡(0.147±0.011)g/100g，12月齡(0.138±0.007)g/100g，3月齡(0.305±0.017)g/100g，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠胸腺指數(shù)較12月齡亦降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論：用D-gal按0.125g·kg-1·d-1劑量皮下連續(xù)注射40d的方法能成功建立衰老的大鼠模型。隨著年齡的增長(zhǎng)

7、，SD大鼠的體重增長(zhǎng)減慢，血清SOD活力、胸腺指數(shù)逐漸下降，血清MDA含量逐漸增加。
　　第二部分 增齡對(duì)大鼠腸黏膜上皮屏障的影響
　　目的：觀察衰老大鼠腸黏膜上皮屏障結(jié)構(gòu)隨著增齡出現(xiàn)的變化，為腸道老化及延緩腸道衰老方面的研究提供理論依據(jù)。
　　方法：(1)選取3月齡SD大鼠10只（A組）、12月齡SD大鼠10只(B組)、24月齡衰老模型SD大鼠10只（C組），其中24月齡衰老模型大鼠由3月齡SD大鼠予D-gal按0.

8、125g·kg-1·d-1劑量皮下連續(xù)注射40d的方法建立。常規(guī)飼養(yǎng)40d后取各組大鼠末端回腸組織進(jìn)行常規(guī)HE染色，觀察形態(tài)學(xué)改變及絨毛高度、厚度等，運(yùn)用免疫組化技術(shù)Envision兩步法檢測(cè)小腸黏膜組織標(biāo)本中Occludin、ZO-1蛋白的水平;運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)分析小腸黏膜組織標(biāo)本中Occludin mRNA、ZO-1 mRNA的表達(dá)水平;取各組大鼠肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)組織進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，計(jì)算腸道細(xì)菌移位率。
　　(

9、2)比較3月齡組（A組）、12月齡組（B組）和24月齡衰老模型組(C組)間小腸黏膜組織標(biāo)本中Occludin和ZO-1蛋白水平、OccludinmRNA和ZO-1mRNA的表達(dá)水平、腸道細(xì)菌移位率的差異。
　　結(jié)果：(1)24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）小腸黏膜厚度及絨毛高度均較3月齡（A組）降低[小腸黏膜厚度:24月齡(87.6±6.32)μm，12月齡(131.8±5.22)μm，3月齡(162.9±7.28)

10、μm，P＜0.05;絨毛高度:24月齡(56.4±5.38)μm，12月齡(76.7±5.40)μm，3月齡(108.1±6.42)μm，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠小腸黏膜厚度及絨毛高度較12月齡亦降低(P＜0.05)。
　　(2)24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）小腸黏膜組織中緊密連接蛋白(Occludin、ZO-1)表達(dá)均較3月齡（A組）減少[Occludin蛋白:24月齡(2.23±0.60)％，12

11、月齡(4.21±0.61)％，3月齡(12.31±0.94)％，P＜0.05; ZO-1蛋白:24月齡(2.03±0.54)％，12月齡(4.02±0.65)％，3月齡(12.21±0.81)％，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠小腸黏膜組織中緊密連接蛋白(Occludin、ZO-1)表達(dá)較12月齡亦降低(P＜0.05)。
　　(3)24月齡衰老模型鼠（C組）、12月齡大鼠（B組）小腸黏膜組織中OccludinmRNA和ZO-1

12、mRNA相對(duì)表達(dá)量較3月齡（A組）明顯減少[Occludin mRNA:24月齡(0.20±0.03)，12月齡(0.38±0.02)，3月齡(0.66±0.03)，P＜0.05; ZO-1mRNA:24月齡(0.18±0.03)，12月齡(0.37±0.02)，3月齡(0.63±0.03)，P＜0.05]，且24月齡衰老模型鼠小腸黏膜組織中Occludin mRNA和ZO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量較12月齡亦減少(P＜0.05)。