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文檔簡介
1、目的:探討靈芝多糖對抗H2O2誘導(dǎo)的HDF細(xì)胞衰老作用及其可能的細(xì)胞周期調(diào)控機制。 方法:將HDF細(xì)胞培養(yǎng)至24代時分成六組:即青年組、對照組、衰老組(H2O2衰老模型組),靈芝多糖小劑量(50mg/L)、中劑量(100mg/L)和高劑量(150mg/L)組。進行體外常規(guī)培養(yǎng),各靈芝多糖組細(xì)胞從24代開始加靈芝多糖。各靈芝多糖組和衰老組自30代開始每2代加50μlH2O2,直至培養(yǎng)到38代。觀察細(xì)胞形態(tài),采用MTT法檢測細(xì)胞活力
2、;免疫組化法檢測β-半乳糖苷酶活性;RT-PCR法檢測P16INK4a(P16)、cyclinD1、CDK4的表達;采用westernblot法檢測Rb蛋白表達和磷酸化Rb。 結(jié)果:與青年組及對照組細(xì)胞比較,衰老組細(xì)胞活力下降,β-半乳糖苷酶活性升高,cyclinD1mRNA表達升高(p<0.01),CDK4mRNA表達下降(p<0.01),P16蛋白表達升高(p<0.01),Rb磷酸化減少(p<0.01);與衰老組細(xì)胞比較,中
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