bFGF-VEGF復(fù)合肽的免疫應(yīng)答以及抑瘤作用研究.pdf

1、目的:研究發(fā)現(xiàn)bFGF和VEGF具有促進(jìn)血管新生的作用并且在腫瘤血管新生中具有協(xié)同作用,本研究開展VEGF/bFGF復(fù)合多肽(VBP3)免疫C57BL/6J小鼠,然后去探討其免疫應(yīng)答作用并研究抑瘤作用。
　　方法:通過鎳離子柱親和層析和離子交換層析方法純化出誘導(dǎo)表達(dá)的VBP3蛋白,免疫BALB/c小鼠制備抗bFGF和抗VEGF多克隆抗體,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)檢測抗體效價(jià)和特異性。通過遷移抑制及成管試驗(yàn)研究抗體對HUVEC

2、細(xì)胞成管的影響,CCK-8檢測抗體對HUVEC,SKOV3,LL-2細(xì)胞增殖抑制的影響。Western blot檢測抗體對SKOV3,LL-2細(xì)胞的bFGF和VEGF下游信號通路中Erk1/2和Akt磷酸化的影響。VBP3免疫C57BL/6J小鼠,建立LL-2的腫瘤模型,從小鼠的腫瘤和脾臟組織中分離出淋巴細(xì)胞,利用流式細(xì)胞儀檢測相關(guān)CD11b,CD11c,Gr-1的表達(dá)情況并在體內(nèi)研究其抑制LL-2肺癌的生長作用。
　　結(jié)果:SD

3、S-PAGE鑒定表明純化出了純度達(dá)到95％的VBP3蛋白;ELISA方法檢測產(chǎn)生了高滴度的抗體,測得小鼠血清效價(jià)分別為1:180000和1:6000;HUVEC的遷移抑制和成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明VBP3多克隆抗體在抑制了HUVEC的遷移和成管作用,抑制率分別為55%和75%;CCK-8檢測出抗體體外抑制了HUVEC,SKOV3和LL-2細(xì)胞增殖,在抗體濃度為100μg/ml時(shí)抑制率分別達(dá)到17%,39.20%和70%。Western blot

4、結(jié)果表明抗bFGF和抗VEGF多克隆抗體顯著抑制FGFR和VEGFR下游信號通路中Erk1/2和Akt的磷酸化。C57BL/6J小鼠腫瘤模型實(shí)驗(yàn)表明免疫VBP3多肽的小鼠體內(nèi)腫瘤明顯小于對照組,免疫VBP3組的小鼠腫瘤其抑制率為88.5%,結(jié)果表明在一定程度上抑制了體內(nèi)腫瘤的生長。流式細(xì)胞檢測免疫VBP3小鼠的脾臟和腫瘤的淋巴細(xì)胞,結(jié)果顯示其髓系抑制細(xì)胞的比例降低了,表明可能會影響其免疫逃逸作用。
　　結(jié)論:VBP3免疫BALB/