EPOR和STAT5在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及rhuEPO對乳腺細(xì)胞增殖作用研究.pdf

1、目的:紅細(xì)胞生成素(EPO)是促進(jìn)紅細(xì)胞生成的糖蛋白激素，可作用于未成熟紅系細(xì)胞表面的紅細(xì)胞生成素受體促進(jìn)細(xì)胞生存、增殖和分化。：EPO和EPOR也表達(dá)于在多種非造血組織和細(xì)胞中如中樞神經(jīng)系統(tǒng)，內(nèi)皮細(xì)胞以及實體腫瘤等。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子5(STAT5)是EPO/EPOR信號傳導(dǎo)中起關(guān)鍵作用的一種蛋白質(zhì)，參與細(xì)胞的增殖、分化以及調(diào)節(jié)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用。EPOR和STAT5之間的否存在相關(guān)性，臨床上對乳腺

2、癌和其他癌癥患者使用重組人紅細(xì)胞生成素(rhuEPO)治療時，其表達(dá)的EPOR就可能會通過誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和血管生成促進(jìn)腫瘤生長，使得對癌癥患者使用重組人紅細(xì)胞生成素安全性提出質(zhì)疑。本研究探討了EPOR和其信號傳導(dǎo)通路蛋白STAT5在乳腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)及臨床意義，分析了rhuEPO是否對乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖反應(yīng)和對惡性腫瘤預(yù)后的影響。 方法 1、采用RT-PCR分析人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231中EP

3、OR、STAT5A、STAT5B mRNA的表達(dá)情況。 2、選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院外科2005年12月～2006年4月確診的原發(fā)性乳腺癌而未做放化療患者的癌組織標(biāo)50例(均經(jīng)針吸術(shù)前細(xì)胞學(xué)或病理證實)，其中病理組織學(xué)分級Ⅰ級16例，Ⅱ級17例，Ⅲ級17例。以10例正常乳腺組織或良性乳腺組織標(biāo)本作為對照?；颊呔鶠榕裕挲g30～50歲，中位年齡43歲。所有病理切片均由兩位高年資病理醫(yī)師診斷復(fù)核。采用免疫組織化學(xué)S-P(鏈霉素抗

4、生物素蛋白．過氧化物酶連結(jié))法分析乳腺癌組織和正常乳腺組織中EPOR、STAT5蛋白的表達(dá)情況，分析其表達(dá)強度同組織學(xué)分級之間的關(guān)系，以及EPOR和STAT5蛋白之間的相關(guān)性。 3、采用MTT法檢測經(jīng)rhuEPO處理的人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞生長增殖反應(yīng)和細(xì)胞凋亡水平變化。 4、采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測經(jīng)rhuEPO處理的人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的細(xì)胞周期變化，以及EPO/EPOR信號傳導(dǎo)通路中STAT5、BCL-2

5、、BCL-XL蛋白表達(dá)的差異。 5、實驗數(shù)據(jù)采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 1、EPOR、STAq、5A和STAT5B mRNA均表達(dá)于MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中。但是MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞株之間三種基因表達(dá)無差異。 2、EPOR在正常乳腺細(xì)胞呈陰性或弱陽性表達(dá)，無強陽性表達(dá)。EPOR在組織學(xué)分級為、Ⅱ、Ⅲ級的陽性表達(dá)率分別為56.3％、76.5％、94.1％，E

6、POR和乳腺癌組織學(xué)分級正相關(guān)(P=0.004)。STAAT5在正常乳腺細(xì)胞呈陰性著色，無強陽性表達(dá)。STAT5在組織學(xué)分級為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級的陽性表達(dá)率分別為68.8％、76.5％、88.2％，STAT5和乳腺癌組織學(xué)分級正相關(guān)(P=0.03)。乳腺癌組織中EPOR和STAT5蛋白表達(dá)相關(guān)(X<'2>值=5.227，P=0.022)。 3、經(jīng)rhuEPO處理后，MCF-7細(xì)胞凋亡水平無明顯變化(P>0.05)。 4、經(jīng)

7、rhuEPO處理后，MCF-7細(xì)胞周期沒有明顯差異(P>0.05)。對EPO/EPOR信號傳導(dǎo)通路中STAT5、BCL-2、BCL-XL蛋白表達(dá)均無明顯影響(P>0.05)。 結(jié)論 1、EPOR、STAT5A和STAT5B在MCF-7和MDA-MBA-231細(xì)胞中均表達(dá)。 2、EPOR和STAT5在乳腺癌組織中的高表達(dá)可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，與病理組織學(xué)分級成正相關(guān)，EPOR和STAT5的表達(dá)存在相關(guān)。