中藥提取物逆轉K562-ADM細胞的耐藥作用及其機制的初步探討.pdf

1、山東省醫(yī)學科學院碩士學位論文中藥提取物逆轉K562ADM細胞的耐藥作用及其機制的初步探討姓名：喬高娟申請學位級別：碩士專業(yè)：內科學（血液?。┲笇Ы處煟航獓鴦?0090501山東省醫(yī)學科學院碩士學位論文身的毒副作用外，與血液腫瘤患者耐藥產生并非單一機制密切相關。某些中藥本身具有抗癌作用，或可通過調節(jié)機體免疫功能等協(xié)同化療藥物殺滅腫瘤細胞，而中藥又具有來源廣泛、價格低廉、毒副作用小等特點，所以近年來國內外許多學者致力于從中藥中尋找高效、低毒

2、、多靶點的逆轉劑，并且在中藥單體、復方及聯(lián)合用藥等方面均取得了一定進展。目的本實驗在以上研究背景的基礎上，以人急性紅白血病耐藥細胞K562／ADM細胞株為研究對象，建立阿霉素誘導K562／ADM細胞耐藥的模型，觀察兩種中藥處理后細胞對化療藥物的敏感性，以及mdr1、T0p0II基因在mRNA水平的表達變化，觀察兩種中藥提取物黃芩苷、京尼平苷對多藥耐藥(MDR)K562／ADM細胞的耐藥逆轉作用，檢測細胞內ADM的濃度，探討其分子機制。方

3、法’K562厶mM細胞于37℃、5％C02、飽和濕度條件下培養(yǎng)，定期加入ADM(1ug／m1)以刺激mdr1／PgP持續(xù)高表達。無ADM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2周后用于實驗。取對數(shù)生長期的K562／ADM細胞，分別加入終濃度為10／zg／ml黃芩苷、20／zg／ml京尼平苷共孵育72h后，MTr實驗檢測化學藥物敏感性，RTPCR檢測mdr1、TopoII基因在mRNA水平的表達變化，流式檢測細胞內ADM的濃度。每組實驗重復三次，以RPMl640

4、為空白對照組。結果K56秈M細胞對黃芩苷、京尼平苷、空白對照組的Itso值分別為506、674和985聲g／rra，耐藥逆轉倍數(shù)分別為195及146倍。體外作用48h后，02ag／mlADM對應的未加中藥單體組、京尼平苷和黃芩苷的增殖抑制率分別是(66118)％、(4168131)％和(4835226)％。而04#g／miADM對應的未加中藥單體組、京尼平苷和黃芩苷的增殖抑制率分別是(1524286)％、(45236)％和(44。219

5、3)％。半定量分析PCR擴增產物光密度相對表達量顯示，K562／ADM細胞分別與50肛g／ml黃芩苷、100#g／ml京尼平苷共同孵育72h后，細胞內mdr1基因表達逐漸減弱，TopoII基因表達逐漸增強，Caspase一3基因表達增強(P001)，流式檢測細胞內ADM濃度較空白組提高(尸005)。結論分別經中藥單體黃芩苷、京尼平苷處理后，耐藥K562／A02細胞部分恢復了對ADM的敏感性，增殖性受到明顯抑制，結果表明上述兩種中藥單體可