新型輸精管節(jié)育器材料——(絡(luò)合銅納米高分子復(fù)合材料)的生物相容性研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：絡(luò)合銅納米高分子復(fù)合材料的體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)
　　 目的：利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)絡(luò)合銅納米高分子復(fù)合材料（以下簡(jiǎn)稱絡(luò)合銅材料）的細(xì)胞毒性進(jìn)行研究，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：分別采用間接接觸法（MTT法）和直接接觸法評(píng)價(jià)絡(luò)合銅材料的細(xì)胞毒性。MTT法：采用體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細(xì)胞（L929），在培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的絡(luò)合銅材料浸提液（25%、50%和100%），

2、于接種后第2、4、7 d通過MTT法顯色，在酶標(biāo)儀492 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖率，對(duì)絡(luò)合銅材料的細(xì)胞毒性進(jìn)行評(píng)價(jià)；直接接觸法：將L929細(xì)胞與絡(luò)合銅材料直接接觸培養(yǎng)，逐日用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生的變化，評(píng)價(jià)絡(luò)合銅材料的細(xì)胞毒性。
　　 結(jié)果：在培養(yǎng)各時(shí)間點(diǎn)除陽性對(duì)照組毒性為4級(jí)（細(xì)胞增殖率為0～20%）外，其余均為0或1級(jí)（細(xì)胞相對(duì)增殖率>90%），除陽性對(duì)照組外，各實(shí)驗(yàn)組及陰性對(duì)照組OD值均隨培養(yǎng)天數(shù)

3、的增加而升高，培養(yǎng)2，4，7 d時(shí)陽性對(duì)照組的OD值明顯低于其他組（P<0.01），陰性對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組間無顯著差異（P>0.05）。L929細(xì)胞在絡(luò)合銅材料表面粘附生長(zhǎng)，隨時(shí)間推移，粘附細(xì)胞數(shù)量增加，細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)與陰性對(duì)照組比較無明顯差異，評(píng)分絡(luò)合銅材料的細(xì)胞毒性為0 級(jí)。
　　 結(jié)論：絡(luò)合銅材料無明顯細(xì)胞毒性，具有良好細(xì)胞相容性，是一種具有發(fā)展前景的輸精管節(jié)育器材料。
　　 第二部分：絡(luò)合銅納米高分子復(fù)合材料的急性全

4、身毒性試驗(yàn)
　　 目的：通過小鼠腹腔注射絡(luò)合銅材料浸提液，以判斷該材料的急性全身毒性作用。
　　 方法：選20只20 g左右的健康小白鼠，雌雄各半，隨機(jī)分2組，記錄初始體重。實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射絡(luò)合銅材料的生理鹽水浸提液，劑量為50ml/kg，對(duì)照組注射生理鹽水。注射后24、48及72 h觀察小鼠一般狀態(tài)及毒性表現(xiàn)和死亡數(shù)及體重變化。并于試驗(yàn)結(jié)束后抽取小鼠靜脈血檢測(cè)血液學(xué)指標(biāo)。
　　 結(jié)果：三天觀察期內(nèi)小鼠無死亡，

5、各組動(dòng)物未見中毒癥狀或不良反應(yīng)，體重明顯增加。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠體重增長(zhǎng)均無明顯差異（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血液學(xué)指標(biāo)ALT、AST、TP、ALB、GLU、BUN和CRE，比較差異無顯著性（P>0.05）。
　　 結(jié)論：絡(luò)合銅材料無急性全身毒性反應(yīng)。
　　 第三部分：絡(luò)合銅納米高分子復(fù)合材料的肌肉植入試驗(yàn)
　　 目的：通過將絡(luò)合銅材料植入新西蘭白兔背部肌肉內(nèi)，觀察植入后不同時(shí)期該材料周圍組織反應(yīng)情況，以評(píng)

6、價(jià)材料在肌肉組織中的組織反應(yīng)程度。
　　 方法：將絡(luò)合銅材料植入新西蘭大耳白兔（共15只）脊柱一側(cè)肌肉，對(duì)側(cè)假手術(shù)，每側(cè)各選擇4個(gè)植入點(diǎn)，每點(diǎn)間隔2 cm，將材料送入深度1～2 cm的肌肉內(nèi)，縫合肌肉及皮膚，植入1、4、12 W分別處死各5只，取出脊柱兩側(cè)肌肉，肉眼觀察植入部位有無皮下和肌肉組織異常病變。同時(shí)切取包裹材料樣品周圍0.5～1 cm的肌肉組織，伊紅－蘇木精染色，光學(xué)顯微鏡下觀察，比較試驗(yàn)材料植入部位周圍組織反應(yīng)情況以

7、及纖維囊腔厚度、炎癥細(xì)胞和其他細(xì)胞存在情況、材料組織界面處的其他異常情況。
　　 結(jié)果：植入1W時(shí)，機(jī)體表現(xiàn)為急性炎癥反應(yīng)，絡(luò)合銅材料局部組織的炎性細(xì)胞反應(yīng)為Ⅳ級(jí)，未形成完整纖維包囊。4W以后急性炎癥反應(yīng)逐漸消失，表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞逐漸消失，代之以少量的淋巴細(xì)胞，組織-材料界面有致密的纖維囊腔形成，炎性細(xì)胞反應(yīng)為Ⅱ級(jí)，囊腔反應(yīng)為Ⅲ級(jí)。12W后囊腔趨于穩(wěn)定，炎性細(xì)胞及囊腔反應(yīng)均為Ⅰ級(jí)。
　　 結(jié)論：絡(luò)合銅材料植入肌肉局部組織