苦豆子總堿及四種單體生物堿對(duì)幽門螺桿菌的體外抑菌作用研究.pdf

1、目的：探討苦豆子總堿、苦參堿、苦參素、槐定堿、槐果堿體外抑制H.pylori的作用。
　　 方法：使用改良哥倫比亞培養(yǎng)基抽氣換氣法體外分離、培養(yǎng)H.pylori，通過形態(tài)學(xué)鑒定和生化鑒定對(duì)菌落進(jìn)行判斷；H.pylori菌株采用專用保存液凍存；建立H.pylori復(fù)蘇方法；選用5種苦豆子生物堿(苦豆子總堿、苦參堿、苦參素、槐定堿、槐果堿)，紙片擴(kuò)散法粗測抑菌濃度范圍；依據(jù)粗測范圍，液體倍比稀釋法測定5種生物堿的最小抑菌濃度(MIC

2、)。
　　 結(jié)果：1.共采集臨床標(biāo)本197例，分離培養(yǎng)后獲得H.pylori菌株81株，陽性率41.12％。2.采用改良哥倫比亞固體培養(yǎng)基抽氣換氣法培養(yǎng)3～5天后，肉眼觀察到培養(yǎng)基表面的菌落為無色半透明，針尖大小，濕潤似露滴狀。涂片染色后鏡檢，呈革蘭染色陰性，螺旋狀、弧形或海鷗狀。尿素酶及氧化酶試驗(yàn)強(qiáng)陽性，觸酶試驗(yàn)陽性。經(jīng)鑒定可確定所分離的細(xì)菌為H.pylori。3.H.pylori保存液將經(jīng)鑒定的細(xì)菌配成菌液，置于Eppend

3、of管中，封口膜密閉后-80℃保存。4.取凍存H.pylori菌株，37℃水浴快速解凍，2500r/min離心5min，棄去上清，沉淀用移液器打散混勻，吸到H.pylori固體培養(yǎng)基中，三線法劃線接種，于微需氧(5％O2、10％CO2和85％N2)，溫度37℃，濕度＞90％條件下，培養(yǎng)48～72h，即可復(fù)蘇成功。5.苦豆子總堿≥50 mg/mL時(shí)出現(xiàn)抑菌圈，其直徑10 mm；苦參堿≥100mg/mL時(shí)出現(xiàn)抑菌圈，其直徑9 mm；苦參素≥

4、100 mg/mL時(shí)出現(xiàn)抑菌圈，其直徑10 mm；槐定堿≥200 mg/mL時(shí)出現(xiàn)抑菌圈，其直徑8 mm；槐果堿在所有濃度下均無抑菌圈出現(xiàn)。6.液體倍比稀釋法測得苦豆子總堿的MIC為32 mg/mL，在體外對(duì)H.pylori有一定的抑制作用?？鄥A、苦參素的MIC為64 mg/mL，槐定堿的MIC為128 mg/mL，體外抑菌活性微弱?；惫麎A在體外對(duì)H.pylori無明顯抑制作用。
　　 結(jié)論：1.固體培養(yǎng)基培養(yǎng)H.pylori

5、的最佳條件為：哥倫比亞培養(yǎng)基4.25g溶于蒸餾水200ml中，高壓滅菌，冷卻至50～60℃后，加10％葡萄糖10ml、抗生素1ml、無菌脫纖維羊血14ml，微需氧(5％O2、10％CO2和85％N2)，溫度37℃，濕度＞90％。2.液體培養(yǎng)H.pylori的最佳條件：布氏肉湯粉2.8g，溶于蒸餾水20ml中，高壓滅菌，冷卻至50～60℃后，加小牛血清2ml，10％的葡萄糖1m1，抗生素0.1ml，淀粉0.1g，微需氧(5％O2、10％C