SPC-neu-polyA轉(zhuǎn)基因小鼠的建立以及表型鑒定.pdf

1、目的:目前,肺癌已經(jīng)成為威脅人類健康的第二大癌癥,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建整合外源基因SPC-neu-polyA的轉(zhuǎn)基因小鼠,對(duì)其表型進(jìn)行鑒定,旨在通過(guò)該轉(zhuǎn)基因小鼠模型研究neu基因在發(fā)展中的作用以及肺炎與肺癌的關(guān)系。
　　 方法:本實(shí)驗(yàn)分為兩大部分,第一部分為顯微注射得到整合SPC-neu-polyA的轉(zhuǎn)基因小鼠,通過(guò):PCR、Southern blot、Western blot、FISH、免疫組化對(duì)其進(jìn)行鑒定,第二部分為轉(zhuǎn)基因小鼠的表

2、型鑒定,病理切片HE染色病理鑒定,Real-Time PCR鑒定炎癥因子的表達(dá)、免疫組化鑒定炎癥因子蛋白的表達(dá)。補(bǔ)充實(shí)驗(yàn):免疫組化檢測(cè)10例肺癌病人組織活檢標(biāo)本的neu蛋白表達(dá)和炎癥因子的表達(dá)。
　　 結(jié)果:通過(guò)PCR、Southern blot、FISH、檢測(cè)SPC-neu-polyA完整的整合到轉(zhuǎn)基因小鼠的16號(hào)染色體上。Western blot檢測(cè)到了轉(zhuǎn)基因小鼠中有neu蛋白的表達(dá),IHC實(shí)驗(yàn)顯示neu蛋白在轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠

3、的肺泡和支氣管上皮表達(dá)。
　　 病理切片HE染色發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性鼠較正常小鼠有明顯的炎癥病變,并在年長(zhǎng)小鼠中出現(xiàn)上皮細(xì)胞增生嚴(yán)重等癌前病變現(xiàn)象。免疫組化檢測(cè)到10例肺癌病人肺組織活檢標(biāo)本均呈neu陽(yáng)性或弱陽(yáng)性,并伴有炎癥因子表達(dá)。
　　 結(jié)論:從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,SPC-neu-polyA轉(zhuǎn)基因小鼠已建系成功,表型鑒定為其為炎癥到癌前病變的炎癥疾病動(dòng)物模型。該動(dòng)物模型可用于研究neu在肺癌發(fā)展中的作用和研究肺炎與肺癌的關(guān)系。<

4、br>　　 目前,癌癥是導(dǎo)致人類死亡的主要因素之一。盡管在癌癥治療方面取得了巨大進(jìn)展,但是,其較高的復(fù)發(fā)率還是會(huì)導(dǎo)致死亡。連續(xù)治療失敗的一個(gè)可能因?yàn)槭?殘留的惡性細(xì)胞有類似干細(xì)胞的分化潛能,這樣就能再次形成腫瘤和造成病灶轉(zhuǎn)移。腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell,CSC)假說(shuō)認(rèn)為,腫瘤組織中存在具有自我跟新能力,無(wú)限增殖和腫瘤形成能力的一小部分腫瘤細(xì)胞,近年來(lái),隨著在血液腫瘤和實(shí)體瘤中相繼發(fā)現(xiàn)CSC存在的相關(guān)證據(jù),對(duì)CSC的生