一株新的人腎癌原代細胞系的建立及其生物學特性的鑒定.pdf

1、[研究背景]
　　腎細胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是起源于腎實質(zhì)泌尿小管上皮系統(tǒng)的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％-90％。，約占成人惡性腫瘤的2％-3％。各個國家或者地區(qū)的發(fā)病率不同，發(fā)達國家發(fā)病率高于發(fā)展中國家，每年死于腎細胞癌的人數(shù)大約有10萬多例并且發(fā)病率還在逐年遞增。我國各地區(qū)腎癌的發(fā)病率差異也較大，據(jù)全國腫瘤防治研究辦公室和衛(wèi)生統(tǒng)計信息中心統(tǒng)計我國試點市，縣1988-1997年腫瘤發(fā)病及死亡

2、資料顯示：腎癌的發(fā)病率和死亡率均有上升趨勢；男女比例約為2：1；城市地區(qū)高于農(nóng)村地區(qū)，發(fā)病年齡可見于各年齡段，高發(fā)年齡為50-70歲。外科手術仍然是局部性腎癌的首選治療方法，然而對于轉(zhuǎn)移性腎癌尚無標準的治療方案仍采用內(nèi)科為主的綜合治療，極少數(shù)患者可通過外科手術而治愈。所以，研究腎細胞癌的發(fā)病機理和治療方法已經(jīng)成為泌尿外科臨床治療中努力的方向。
　　1988年,國內(nèi)建成了首例體外培養(yǎng)的“人腎癌細胞系”。為人腎細胞癌的基礎和臨床研究提

3、供了極其重要的細胞實驗模型。但是隨著實驗的不斷開展，需要對細胞系進行不斷的體外傳代,于是一些生物學特征會漸漸的改變或消失，所以不斷建立新的細胞系已經(jīng)成為研究腎細胞癌的發(fā)病機理和探尋新的治療方法的重要環(huán)節(jié)。
　　裸鼠，顧名思義為無毛鼠，于1962年由英國的Crist發(fā)現(xiàn)。裸鼠體內(nèi)無胸腺，因此無法生成成熟的T淋巴細胞，所以具有免疫缺陷的特性。移植于裸鼠的人體腫瘤組織，因受到較小的排斥反應而更容易生長存活。1969年，Rygaard首次

4、建立了裸鼠人結腸腺癌模型。目前為止世界上已經(jīng)建立了500種以上的人體腫瘤裸鼠模型。裸鼠現(xiàn)在已經(jīng)成為研究人體惡性腫瘤的生物學特性以及篩選針對相應腫瘤的抗癌藥物的常用工具，其應用范圍包括腫瘤學，免疫學，細胞生物學以及藥理學等各項基礎醫(yī)學直接對裸鼠皮下進行手術標本組織塊的包埋移植法其移植的成功率要高于利用手術標本組織塊直接培養(yǎng)法以及利用手術標本組織塊制成腫瘤細胞懸液直接注射法，成為建立腫瘤細胞系的常用方法。因此本研究根據(jù)此方法成功建立了一株穩(wěn)

5、定傳代的腎細胞癌細胞系。
　　[目的]
　　利用腎癌病人手術標本皮下包埋于裸鼠的方法建立裸鼠移植模型,通過裸鼠間傳代及體外傳代培養(yǎng)的方法建立了一株新的人腎癌細胞系，并且初步對該細胞系進行鑒定,為進一步的腎癌基礎研究提供了實驗模型。
　　[方法]
　　1.人腎癌原代細胞系的建立
　　2008-2009年間共采集20例腎癌新鮮手術標本，于手術后1h內(nèi)將每例標本切取四塊0.5cm×0.5cm×0.5cm組織塊,分

6、別包埋于2只裸鼠的右后肢皮下及背部皮下,連續(xù)鼠間傳代3次,取移植瘤繼續(xù)體外培養(yǎng)傳代，連續(xù)傳110代。
　　2.人腎癌原代細胞系的生物學特性鑒定
　　對得到的細胞株進行細胞形態(tài)的觀察，繪制細胞株生長曲線，細胞DNA含量測定，染色體核型分析，軟瓊脂集落形成率實驗，刀豆球蛋白A凝集實驗，白細胞介素6的生物活性測定及病理學檢查。
　　[結果]
　　1.人腎癌原代細胞系的建立
　　其中1只裸鼠皮下移植瘤生長,繼續(xù)傳代

7、,腫瘤生長速度明顯加快。取移植瘤標本行體外組織塊培養(yǎng)，連續(xù)傳110代后，得到人腎癌細胞株記為XJG-9201。
　　2.人腎癌原代細胞系的生物學特性鑒定
　　細胞形態(tài)結構,分化程度均與原發(fā)腫瘤一致；染色體眾數(shù)為65；細胞群體倍增時間為38.2h；細胞周期分析：G1期62.7％,G2期11.2％,S1期25.3％,；軟瓊脂集落形成率為70％；當?shù)抖骨虻鞍譇濃度為12.5μg/ml時,細胞即發(fā)生明顯凝集；病理學檢查具有腎透明細胞