骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣-富血小板血漿凝膠支架材料體內(nèi)成骨與血管化初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣/富血小板血漿凝膠支架材料體外定向成骨誘導(dǎo)后植入比格犬脛骨上段骨缺損中構(gòu)建組織工程骨并修復(fù)體內(nèi)骨缺損能力及血管化的情況。 方法:（1）比格犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及強(qiáng)化磷酸三鈣/富血小板血漿凝膠復(fù)合支架材料的制備，包括BMSCs的分離、純化和擴(kuò)增，富血小板血漿的制備。（2）比格犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合單純強(qiáng)化磷酸三鈣支架材料及強(qiáng)化磷酸三鈣/富血小板血漿凝膠支架體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)1周。（3）細(xì)胞復(fù)合單

2、純強(qiáng)化磷酸三鈣支架材料復(fù)合物、自體髂骨及細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣/富血小板血漿凝膠支架材料復(fù)合物隨機(jī)植入比格犬雙后肢脛骨平臺(tái)下方骨缺損處。觀察植入物的表面變化、骨痂形成、骨缺損修復(fù)情況及周?chē)M織反應(yīng)。（4）術(shù)后4、8、12周取材行HE染色計(jì)數(shù)微血管密度（MVD），同時(shí)行骨鈣素蛋白免疫組織化學(xué)染色觀察其表達(dá)情況。（5）RT-PCR檢測(cè)體內(nèi)各組在4、8、12周時(shí)OCN、VEGF的mRNA的表達(dá)情況，并對(duì)兩者的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果:（1

3、）各組材料植入比格犬脛骨骨缺損后，傷口生長(zhǎng)良好，沒(méi)有全身和局部的炎癥、毒性反應(yīng)及排斥反應(yīng)，傷口一期愈合。細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣/富血小板血漿凝膠支架材料組材料降解較快。（2）術(shù)后4、8、12周取材行MVD測(cè)定細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣/富血小板血漿凝膠支架材料組MVD值與髂骨組接近，高于細(xì)胞復(fù)合單純材料組。（3）術(shù)后4、8、12周取材行骨鈣素蛋白免疫組織化學(xué)染色可見(jiàn)各組均可觀察到新生軟骨成骨情況，強(qiáng)化磷酸三鈣/自體富血小板血漿凝膠復(fù)合材料組表達(dá)

4、較細(xì)胞復(fù)合單純強(qiáng)化磷酸三鈣材料組更強(qiáng)。（4）各組在4、8、12周各組均可見(jiàn)OCN、VEGF的mRNA表達(dá)條帶出現(xiàn)。比較4、8、12周各組目的條帶和內(nèi)參灰度值，8、12周時(shí)Ⅱ組和Ⅲ組各項(xiàng)表達(dá)強(qiáng)于Ⅰ組，Ⅱ組和Ⅲ組之間無(wú)明顯差異。OCN、VEGF的mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。 結(jié)論:（1）犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣/自體富血小板血漿凝膠復(fù)合支架材料經(jīng)體外誘導(dǎo)后在犬體內(nèi)能獲得良好的血管化。（2）犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合強(qiáng)化磷酸三鈣/自體