漆酶在交聯(lián)聚乙二醇二丙烯酸酯上的固定化及性能研究.pdf

1、酶是一種生物催化劑，游離酶存在的缺點已經(jīng)不能適應(yīng)現(xiàn)代工業(yè)生產(chǎn)的需要，固定化材料的選擇是固定化酶研究的重點。交聯(lián)聚乙二醇二丙烯酸酯是一種高分子聚合物材料，性質(zhì)溫和，吸水性強，其獨特的結(jié)構(gòu)和性能使其可能成為漆酶固定化的潛在載體。
　　以聚乙二醇(600，6000，20000)為原料采用醇-酰氯法合成了不同分子量的聚乙二醇二丙烯酸酯(polyglycol diacrylate)，進一步在偶氮二異丁腈引發(fā)下得到交聯(lián)聚乙二醇二丙烯酸酯(cr

2、oss-linked polyglycol diacrylate)載體，并研究了載體對漆酶的固定化效果。結(jié)果表明：交聯(lián)PEG(20000)DA對漆酶的固定化效果最好；最佳交聯(lián)條件為：交聯(lián)劑濃度為0.5％，交聯(lián)溫度為175℃，交聯(lián)時間為30min。
　　對漆酶固定化優(yōu)化的最佳條件為：pH為3.5的緩沖液稀釋103倍的漆酶溶液，固定4h，4℃下靜置15h，加酶液量為30mL/0.1g載體，此時漆酶在載體上的負載量為0.792mg/g。

3、固定化漆酶最適溫度為60℃；最適pH為3.5；米氏常數(shù)為3.37×10-4mol/L；酶活為54.57U/(g·min)，即單位質(zhì)量漆酶的活性為68.90U/(mg·min)；固定化效率為54.3%。
　　結(jié)果表明，固定化漆酶在不同的pH值下放置1h，當(dāng)pH值在3～5時酶活保留在80%以上；使用7批次的固定化漆酶的酶活回收達到60%以上，其他批次酶活損失很少；放置20天的樣品，固定化漆酶酶活基本沒變；70℃下進行固定化漆酶的熱穩(wěn)定

4、性測試，發(fā)現(xiàn)隨著時間延長，固定化漆酶的活性比游離漆酶下降速率要慢得多，說明熱穩(wěn)定性得到了有效提高。
　　采用固定化漆酶對2,4-二氯苯酚進行降解實驗，研究了pH值、底物濃度和酶量以及時間對降解的影響。實驗表明，固定化漆酶降解2,4-二氯苯酚的最適pH為6.5；底物濃度為20mg/L時降解24h效果最好，降解率達到85%；當(dāng)固定化酶質(zhì)量:酚質(zhì)量=143:1(蛋白質(zhì)量:酚質(zhì)量=1:8.889)時，24h內(nèi)的降解效率最高；固定化漆酶對2