抵抗素對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)PAI-1、t-PA的機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　代謝綜合征（metabolic syndrome, MS）是一組主要以腹型肥胖，高血壓，胰島素抵抗和血脂代謝障礙的病理生理狀態(tài)，代謝綜合征存在血栓前狀態(tài)被認(rèn)為與血栓性疾病有著密切的聯(lián)系，但其具體機(jī)制目前尚不清楚。由脂肪細(xì)胞及單核細(xì)胞等細(xì)胞分泌的脂肪細(xì)胞因子抵抗素（resistin, Re）在代謝綜合征的發(fā)生、發(fā)展中起重要的作用，抵抗素的炎癥作用及其引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂可能是引起代謝綜合征患者血栓性疾病的重要原因之

2、一。本課題組前期研究結(jié)果表明，在體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）中，抵抗素對組織型纖溶酶原激活抑制物-1（plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）、組織型纖溶酶原激活物（tissue plasminogen activator, t-PA）平衡的打破可能與細(xì)胞內(nèi)的環(huán)磷酸腺苷（Adenosine3’,5’-c

3、yclic monophosphate, cAMP）水平及細(xì)胞絲裂原活化蛋白激酶p38（p38 mitogen activated protein kinase, p38MAPK）的激活密切相關(guān)，初步揭示了抵抗素的細(xì)胞內(nèi)作用途徑，為代謝綜合征患者血栓性疾病的發(fā)病機(jī)制和防治提供了思路及理論依據(jù)。但抵抗素在細(xì)胞內(nèi)的具體作用機(jī)制尚不清楚。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)旨在進(jìn)一步觀察抵抗素引起PAI-1、t-PA失衡與cAMP及p38MA

4、PK的關(guān)系，進(jìn)一步探討代謝綜合征患者易患血栓性疾病的原因及機(jī)制。
　　方法：
　　1. HUVECs4-5代分為單純培養(yǎng)基對照組、不同濃度cAMP（10、30、100、300μM）組，培養(yǎng)48h后，MTT法檢測細(xì)胞活性。
　　2. HUVECs4-5代分為6組：單純培養(yǎng)基組（control組），50ng/ml抵抗素組，cAMP（30μM）組，cAMP（30μM）+抵抗素（50ng/ml）組，SB203580（10μM）

5、組，SB203580（10μM）+抵抗素（50ng/ml）組，混合組在抵抗素加入前予 cAMP和SB203580預(yù)處理1h，培養(yǎng)48h后ELISA法測各組上清液中PAI-1蛋白水平。
　　3. HUVECs4-5代分為4組：control組，50ng/ml抵抗素組，cAMP（30μM）組，cAMP（30μM）+抵抗素（50ng/ml）組，混合組在抵抗素加入前予cAMP預(yù)處理1h，培養(yǎng)48h后ELISA法測各組上清液中t-PA蛋白水

6、平。
　　4. HUVECs4-5代分為5組：control組，50ng/ml抵抗素組，cAMP（30μM）組，cAMP（30μM）+抵抗素（50ng/ml）組，SB203580（10μM）+抵抗素（50ng/ml）組，混合組在抵抗素加入前予cAMP和SB203580預(yù)處理1h，培養(yǎng)48h后real-time RT-PCR法檢測各組PAI-1 mRNA的表達(dá)。
　　5. HUVECs4-5代分為4組：control組，50n

7、g/ml抵抗素組，cAMP（30μM）組，cAMP（30μM）+抵抗素（50ng/ml）組，混合組在抵抗素加入前予cAMP預(yù)處理1h，培養(yǎng)48h后real-time RT-PCR法檢測各組t-PA mRNA的表達(dá)。
　　6. HUVECs4-5代分為control組，抵抗素（50ng/ml）組，cAMP（30μM）組，cAMP（30μM）+抵抗素（50ng/ml）組，培養(yǎng)30min后，Western blot法檢測各組P38MAP

8、K蛋白磷酸化水平。
　　結(jié)果：
　　1.10μM及30μM cAMP濃度組對 HUVECs的細(xì)胞活力沒有明顯影響（P>0.05），但100μM及300μM cAMP濃度組對HUVECs的細(xì)胞活力產(chǎn)生明顯抑制（P<0.05）。
　　2.與control組比抵抗素組單獨(dú)作用明顯升高 PAI-1mRNA及蛋白水平（P<0.05或P<0.01）；但與單獨(dú)抵抗素組相比，cAMP與抵抗素合用及p38MAPK抑制劑SB203580與

9、抵抗素合用后，PAI-1mRNA及蛋白水平明顯降低（P<0.05或P<0.01）；而抵抗素及cAMP均對HUVECs分泌t-PA在mRNA及蛋白水平上的表達(dá)均無影響。
　　3.50ng/ml抵抗素可使HUVECs P38MAPK蛋白磷酸化水平明顯增高，但30μM cAMP能明顯地減弱50ng/ml抵抗素對HUVECs P38MAPK的蛋白磷酸化水平（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　抵抗素可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的cAMP水平