大鼠對膳食誘導肥胖和胰島素抵抗的易感性、大豆異黃酮的影響及其機制研究.pdf

1、l 膳食誘導肥胖和胰島素抵抗大鼠模型的建立 目的：復制肥胖與胰島素抵抗模型大鼠，為后續(xù)試驗作準備。 方法：82只SD雄性大鼠按體重隨機分為基礎飼料組(n=10)和高脂高蔗糖飼料組(n=72)，分別喂飼基礎和高脂高蔗糖飼料，8周后，篩選模型大鼠：①高脂高蔗糖飼料組大鼠空腹體重大于基礎飼料組均數(shù)加1.4個標準差者入選為肥胖(Ob)模型大鼠；②高脂高蔗糖飼料組大鼠胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)大于基礎飼料組均數(shù)加1.96個標

2、準差者入選為胰島素抵抗(IR)模型大鼠. 結果：Ob與IR大鼠模型成功率分別為58.3％、66.7％。 2 大鼠對膳食誘導肥胖和IR易感性的比較 目的：了解對高脂高蔗糖膳食誘導肥胖、IR易感性不同大鼠間的差異，并探討其可能機制。 方法：動物造模方法、Ob、lR模型成立的判定方法及基礎飼料對照組(Bas-C)處理方法同“1”。第一部分高脂高蔗糖飼料喂養(yǎng)大鼠(大豆異黃酮干預大鼠除外)分為以下4組：非肥胖+

3、非IR組(nOb+nlR，肥胖及IR大鼠篩選后剩余的)、Ob+IR組(Ob+IR，既符合Ob標準又存在IR)、Ob+非lR組(Ob+nlR，符合Ob而不符合IR判定標準)、非Ob+IR組(nOb+IR，符合IR、但不符合Ob判定標準)。Bas-C繼續(xù)喂養(yǎng)基礎飼料，其余4組在分組后繼續(xù)喂飼高脂高蔗糖飼料。4周后，空腹采集標本。檢測靜脈全血血糖、血清胰島素、C反應蛋白(CRP)、腫瘤壞死因予(TNF)-a、白介細胞介素(1L)-6脂聯(lián)素(a

4、diponeetin，APN)、抵抗素(resistin)、瘦素(1eptin)含量，腎周脂肪脂聯(lián)素、抵抗素、瘦素、葡萄糖轉運蛋白-4(GLUT-4)、過氧化物酶體增生物激活受體-γ(PPAR-γ)、核因子-kB(NF-kB)p65亞基、Bax及Bcl-2等基因mRNA表達及NF-KB活性。 結果：①Ob+IR組的體重、內臟脂肪含量、HOMA-IR、血清IL-6、TNF-α、CRP、抵抗素(包括腎周脂肪mRNA及循環(huán)血蛋白)、瘦

5、素(腎周脂肪細胞mRNA)及腎周脂肪NF-KB活性顯著高于nOb+nlR組(P<0.05)，脂聯(lián)素(包括-腎周脂肪mRNA及循環(huán)血蛋白)顯著低于nOb+nlR組(P<0.05)②分組時，nOb+nIR與nOb+IR兩組體重沒有明顯差異。4周高脂高蔗糖飼料繼續(xù)干預后，nOb+IR組體重顯著增加，已不具備肥胖抵抗的特性，趨同于Ob+IR：⑧分組時，nOb+nIR與Ob+nIR兩組HOMA-IR無顯著差異，4周高脂高蔗糖飼料繼續(xù)干預后，Ob+

6、nIR組的HOMA-IR已顯著高于nOb+nlR；④nOb+IR組體重、內臟脂肪含量顯著低于Ob+lR組，包括HOMA-IR在內的其它指標兩組間均無顯著性差異；⑤nOb+IR組體重、內臟脂肪含量顯著低于Ob+nlR組，其它指標兩組未見差異；⑥分組時，Ob+IR與Ob+nlR兩組體重無顯著差異，HOMA-IR差異顯著，但高脂高蔗糖飼料繼續(xù)干預4周后，兩組的HOMA-IR和其他指標均不具統(tǒng)計學差異(P>0.05)，此時Ob+nlR已趨同于O

7、b+IR；⑦nOb+nIR、Ob+IR、nOb+IR、Ob+nlR四組間，腎周脂肪組織GLUT-4 mRNA水平無顯著差異；⑧0b+IR、nOb+IR、Ob+nlR組白色脂肪細胞凋亡率低于nOb+nlR及Bas-C組；⑨nOb+nIR與Bas．C組比較，所有指標均無顯著性差異(P>0-05)。3脂聯(lián)素、抵抗素基因單核苷酸多態(tài)性與膳食誘導Ob和IR易感性的關系 目的：了解脂聯(lián)素、抵抗素單核苷酸多態(tài)性(SNPs)在膳食誘導大鼠肥胖、

8、胰島素抵抗不同易感性中起的作用。 方法：動物造模方法、Ob、IR模型成立的判定方法同“1”。高脂高蔗糖飼料喂養(yǎng)大鼠分為以下4組：Ob組、IR組、肥胖抵抗(Ob-R，體重小于基礎飼料對照組平均體重+1個標準差)和抗胰島素抵抗(IR-R，HOMA-IR小于對照組均數(shù)+1個標準差)組。檢測Ob、IR、Ob．R、IR-R四種狀態(tài)大鼠腎周脂肪脂聯(lián)素(C114T，C509T)、抵抗素(C105G)的SNPs，觀察SNPs在四種狀態(tài)大鼠中的分

9、布。 結果：脂聯(lián)素基因的2個SNPs位點(Cll4T，C509T)在Ob與Ob-R、瓜與IR-R之間的分布沒有明顯差異(P>0.05)；抵抗素基因C105G位點SNPs在Ob與Ob-R之間的分布無統(tǒng)計學差異，但在IR與IR-R間的分布有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 4 大豆異黃酮對肥胖和胰島素抵抗大鼠胰島素敏感性的影響及機制研究 目的：觀察大豆異黃酮(SIF)對高脂高蔗糖膳食誘導肥胖(Ob)、胰島素抵抗(IR)大鼠

10、胰島素敏感性(IS)的影響及作用機制。 方法：42只Ob模型大鼠(依據(jù)體重大小)和48只lR模型大鼠(依據(jù)HOMA-IR大小)分別隨機分為：對照組(C，無菌水)、SIF干預的低(SIFL，50 mg·kg<'-1>·d<'-1>)、中(SIFM，150 mg·k<'-1>·d<'-1>)、高(SIFH，450mg·k<'-1>·d<'-1>)劑量組。分組后，Ob和IR 模型大鼠均繼續(xù)喂飼高脂高蔗糖飼料，灌胃相應受試物4周。期間觀

11、察大鼠一般狀況、攝食量、體重。結束時，股動脈取血處死大鼠，采集空腹狀態(tài)標本。檢測指標同“2”。 結果：SIF干預的4周內，各大鼠未見明顯異常。實驗結束時，SIF高劑量組體重、內臟脂肪含量、HOMA-IR均較相應的Ob、IR對照組顯著降低(P<0.05或P<0.01)。SIF高劑量能顯著降低IR大鼠血清IL-6含量(P<0.05)，三個SIF劑量組雖有降低Ob大鼠血清IL-6含量的趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；SlF中、高

12、劑量能降低Ob大鼠、SIF三個劑量能降低IR大鼠的血清TNF-α含量(P<0.05或P<0.01)；Ob、IR大鼠各SIF劑量組的CRP含量與相應對照組比較均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；SIF中、高劑量能顯著提高Ob、IR大鼠腎周脂肪脂聯(lián)素mRNA表達及血清含量(P<0.05或P<0.01)；SIF高劑量能顯著降低Ob、IR大鼠腎周脂肪抵抗素mRNA表達及血清含量(P<0.05或P<0.01)；SIF高劑量能顯著降低瘦素腎周脂肪mRN

13、A表達，升高血清瘦素水平；Ob大鼠SIF高劑量及IR大鼠SIF中、高劑量可以顯著提高腎周脂肪細胞GLUT-4及PPAR-γ mRNA表達(P<0.05或P<0.01)；Ob大鼠SIF三個劑量組及IR大鼠高劑量組可顯著降低腎周脂肪NF-KB p65 mRNA的表達(P<0.05或P<0.01)，lR大鼠SIF高劑量組可顯著降低NF-KB的活性(P<0.05)，其它SIF干預組NF-KB的活性雖未達到顯著性差別，但均有不同程度降低；SIF三

14、個劑量對Ob、IR大鼠腎周脂肪Bax與Bcl-2基因mRNA比值均無明顯影響(P>0.05)。內臟脂肪含量、血清CRP、TNF-α、IL-6、抵抗素、腎周脂肪NF-kB活性與HOMA-IR呈顯著的正相關，即與Is呈負相關(P<0.01)；血清脂聯(lián)素、瘦素含量及腎周脂肪PPAR-γmRNA水平與HOMA-IR呈顯著負相關，即與IS呈正相關(P<0.05或P<0.01)。 結論：①高脂高蔗糖飼料喂養(yǎng)大鼠8周，成功建立了Ob及IR模型

15、，其造模成功率分別為58.3％和66.7％。延長高脂高蔗糖飼料干預時間，可提高Ob與IR的成模率。②在Ob與瓜之間可能存在共同的病理基礎，使兩者相互促進，形成惡性循環(huán)。③對膳食誘導Ob與IR具有不同易感性大鼠間，在低度炎癥介質、脂肪細胞因子等方面存在差異，其機制可能與抵抗素基因C105G位點的SNPs有關、與脂聯(lián)素C114T及C509T位點的SNPs無關。④大豆異黃酮具有提高膳食誘導的Ob和IR模型大鼠胰島素敏感性的作用。其機制至少部分