間接接觸共培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞及相關(guān)調(diào)控基因的時序表達(dá).pdf

1、目的:應(yīng)用新生大鼠心肌細(xì)胞(cardiomyocytes，CMs)與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem colls,MSCs)體外間接接觸共培養(yǎng)的方法模擬心肌內(nèi)環(huán)境，研究模擬環(huán)境下MSCs向CMs的分化情況及相關(guān)調(diào)控基因的時序表達(dá)，篩選MSCs定向分化為心肌細(xì)胞的重要調(diào)控基因。 　方法:MSCs及CMs按1:5的比例進(jìn)行體外間接接觸共培養(yǎng)，連續(xù)觀察兩周，相差顯微鏡下觀察MSCs形態(tài)變化，免疫熒光方法鑒定心肌特征性

2、肌動蛋白α(α-actin)和肌鈣蛋白T(cTnT)的表達(dá)，應(yīng)用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、TEF-1等相關(guān)調(diào)控基因在分化過程中的時序表達(dá)。 　結(jié)果:共培養(yǎng)前MSCs呈成纖維細(xì)胞樣，共培養(yǎng)后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，細(xì)胞體積增大，梭形形態(tài)逐漸變短變粗，近似棒狀或橢圓形，細(xì)胞之間形成連接，排列方向趨于一致。MSCs共培養(yǎng)前及共培養(yǎng)1天、3天未見cTnT及α-actin陽性表達(dá)，共培養(yǎng)5天、

3、7天、14天時cTnT陽性細(xì)胞百分率分別為7.14％、22.435、28.77％，α-actin陽性細(xì)胞百分率分別為9.205、22.88％、28.89％。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培養(yǎng)后一天表達(dá)開始增強(qiáng)，共培養(yǎng)后七天達(dá)高峰，以后雖有所下降但仍維持在較高水平；TEF-1基因在誘導(dǎo)過程中表達(dá)無明顯變化。 　結(jié)論:間接接觸共培養(yǎng)條件下MSCs可分化為心肌樣細(xì)胞；且在此過程中，TGF-β、Nkx-2