異常高表達CK1對肝細胞肝癌的發(fā)生發(fā)展影響的研究.pdf

1、目的:探討異常高表達的CK1與肝細胞肝癌的發(fā)生、發(fā)展、腫瘤侵襲及預后的關系;探討CK1能否作為一種新的腫瘤標志物參與腫瘤的血清學和病理學的診斷,能否成為肝癌靶向治療的標靶。
　　實驗設計:通過雙向電泳、質譜分析篩選出肝癌中特異性高表達的膜蛋白CK1;通過Westernblot,RT-PCR,免疫組化,免疫熒光染色和ELISA等方法明確CK1在人肝癌組織和血液中的表達;研究CK1的異常表達與MVD的關系;通過轉染相應siRNA抑制C

2、K1的表達后,應用MTT及Transwell分別檢測轉染前后HepG2細胞的增值和侵襲能力的變化;應用裸鼠成瘤實驗檢測CK1在體內(nèi)對腫瘤細胞增殖的影響。
　　結果:(1)雙向電泳及質譜分析結果顯示相對于正常肝組織在肝癌中,膜蛋白CK1高表達。進一步研究發(fā)現(xiàn)在肝細胞肝癌中有86.76％(59/68)的病人異常高表達CK1,免疫組化和免疫熒光證實CK1特異的表達在肝癌細胞膜上;而在非肝癌及肝硬化病人中僅有6.67%(1/15)陽性表達

3、;在mRNA水平,肝癌中CK1的表達量明顯高于正常肝。(2)ELISA證實在肝癌和非肝癌的病人中血清中CK1的表達沒有差異性。(3)在CK1陽性的肝癌中MVD的數(shù)量明顯高于CK1陰性表達的肝癌。(4)轉染CK1siRNA下調(diào)HepG2中CK1表達后,CK1mRNA和蛋白表達量較空白組和對照組均明顯下降。(5)HepG2在下調(diào)CK1后其增值和侵襲能力較空白組和對照組均明顯降低。(6)在實驗組裸鼠中降低CK1表達能抑制腫瘤的生長。