Toll樣受體4和NF-κBp50在大鼠變應(yīng)性鼻炎中的表達(dá).pdf

1、目的：1.建立大鼠變應(yīng)性鼻炎(Allergic rhinitis，AR)動(dòng)物模型
　　 2.提供變應(yīng)性鼻炎模型的鼻粘膜組織形態(tài)學(xué)特征
　　 3.免疫組化測(cè)定Toll樣受體4和NF-κBp50在大鼠變應(yīng)性鼻炎及LPS和地塞米松干預(yù)后鼻粘膜上的表達(dá)情況
　　 4.Western blotting檢測(cè)鼻黏膜組織TLR4蛋白水平表達(dá)
　　 5.探討Toll樣受體4和NF-κBp50與變應(yīng)性鼻炎的關(guān)系
　　

2、 方法：SD大鼠48只，雌雄不限，隨機(jī)分為4組。①A組(變應(yīng)性鼻炎組n=12)：用OVA致敏、激發(fā)建立變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型，模型建立后，改為隔日OVA(10mg/100μL)滴鼻一次維持過(guò)敏狀態(tài)；②B組(變應(yīng)性鼻炎+LPS刺激組n=12)：成功建立為變應(yīng)性鼻炎模型的大鼠，在激發(fā)第7天后隔日滴鼻維持過(guò)敏狀態(tài)，并同時(shí)用LPS(10μg/100μL)滴鼻，每日一次，連續(xù)7天；③C組(正常對(duì)照組n=12)：以生理鹽水行腹腔注射及滴鼻；④D組(地塞

3、米松處理組n=12)：成功建立為變應(yīng)性鼻炎模型的大鼠，在激發(fā)第7天后隔日滴鼻維持過(guò)敏狀態(tài)，并同時(shí)用地塞米松1mg/kg后肢肌肉注射，每日一次，連續(xù)7天。Wright's染色觀察各組鼻黏膜炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，并行高倍鏡下嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)；免疫組化測(cè)定鼻黏膜組織NF-κBp50表達(dá)；Western blotting檢測(cè)鼻黏膜組織TLR4蛋白水平表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以x±s表示，組間比較采用

4、單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果： A、B、D組大鼠均成功激發(fā)為AR動(dòng)物模型，模型組Wright's染色顯示大量中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。鼻黏膜中嗜酸性粒細(xì)胞在A，B組明顯增多，D組經(jīng)DEX處理后明顯減少。形態(tài)學(xué)改變：HE染色見(jiàn)正常鼻粘膜上皮為假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮和復(fù)層扁平上皮，由纖毛柱狀上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、扁平細(xì)胞等組成，黏膜下纖維結(jié)締組織很薄，血管數(shù)量很少，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及血管改變；模型組及LP

5、S刺激后黏膜增厚顯著，小血管增生擴(kuò)張明顯，上皮分泌細(xì)胞增多，上皮下大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下腺體數(shù)量明顯增加，腺體擴(kuò)張；經(jīng)DEX處理后，黏膜厚度逐漸降低，血管擴(kuò)張及腺體增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕。免疫組化：NF-κBp50在各組中主要分布在鼻黏膜假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮和固有層的腺體細(xì)胞內(nèi)，表達(dá)在胞核和胞質(zhì)內(nèi)，染呈棕黃色；TLR4主要分布在鼻黏膜上皮假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮，腺體細(xì)胞以及少許基細(xì)胞內(nèi)，表達(dá)在胞膜和胞質(zhì)內(nèi)，染呈棕黃色。嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)：

6、B組表達(dá)明顯較A、C、D組高(P＜0.01)，A組表達(dá)較C、D組高，C、D間表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。免疫組化顯示各組鼻黏膜中均有NF-κBp50表達(dá)，B組表達(dá)明顯較A、C、D組高P＜0.01)，A組表達(dá)較C、D組高，C組較D組表達(dá)高(P＜0.01)；TLR4在各組鼻黏膜中均有表達(dá)，Western blotting顯示B組表達(dá)明顯較A、C、D組高(P＜0.01)，A組表達(dá)較C、D組高，C、D間表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0

7、5)。
　　 結(jié)論：通過(guò)OVA多次致敏，局部激發(fā)能夠成功地建立大鼠變應(yīng)性鼻炎的動(dòng)物模型。病理形態(tài)學(xué)上的改變：變應(yīng)性鼻炎時(shí)，上皮分泌細(xì)胞明顯增多，黏膜增厚，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及嗜酸性粒細(xì)胞明顯增多，腺體擴(kuò)張?jiān)龆?，小血管的增加，充血。?jīng)DEX處理后，血管擴(kuò)張及腺體增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕。AR大鼠鼻黏膜TLR4和NF-κBp50、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的表達(dá)較正常組增高；LPS刺激后TLR4和NF-κBp50的表達(dá)、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)一步增高