免疫細(xì)胞性NO供體及白血病體外凈化的研究.pdf

1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文免疫細(xì)胞性NO供體及白血病體外凈化的研究姓名：朱梁軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：血液腫瘤內(nèi)科指導(dǎo)教師：陳寶安2001.6.18東南大學(xué)碩士學(xué)位論文A B S T R A C T0 B J E C T I V E ：T oc o n s t r u c tt h er e c o m b i n a n tr e t r o v i r a l v e c t o r s o fp L N C X ／i N O S a n

2、 d t op r o v i d et h e b a s i so f c o n s t r u c t i o n o f C D 3 A K ／i N O SM E T H O D S ：F u l l —l e n g t hc D N A o fi N O Sa m p l i f i e db yP C Rf r o mp C M V ／i N O S v e c t o r w a s c u r e d r e s

3、p e c t i v e l y w i t h r e s t r i c t i o ne n d o n u c l e a s e s H i n d l I I a n dc l aI ．R e t r o v i r a l v e c t o r p L N C XW a Sa l s oc o p e d w i t h H i n dI I Ia n d c l a I ． R e c o m b i n a n t

4、 r e t r o V i r a l v e c t o r sp L N C X ／i N O S w e r e o b t a i n e d w i t h T 4 l i g a s e ．P u r i f i e d r e c o m b i n a n tr e t r o v i r a l v e c t o r s D N A a b s t r a c t e d f r o m t h e c o m p

5、 e t e n c e b a c t e r i aE d c h e r i c h i a C o l L D H 5 口 w e r e t r a n s f e r r e d i n t o t h e a m p h o t r o p i cp a c k a g i n gc e l l l i n eP A 3 17b ym e a n so f l i p o s o m e - m e d i a t e d

6、m e t h o da n ds c r e e n e da n t i - G 4 18 p o s i t i v e c l o n e sw h i c h Ⅵ懈c u l t u r e d 、a b s t r a c t e ds u p e r a n tl i q u i df o rf u r t h e rc o n c i n t r a t i o n ．T h ev i r a lt i t e rW a

7、 sd e t e r m i n e dw i t h t h eN m 3 T 3 ．R E S U L T S ：1 ．T h eg e n er a n ko f i N O S c D N A a m p l i f i e db yP C R w a sc o i n c i d e n c ew i t h i t s g e n e m a pt h r o u g h g e l e l e c t r o p h o

8、 r e s i s ，e n z y m e —c u t t i n ga n a l y s i sa n d g e n es e q u e n c i n g2 ．T h e c u t t i n g f r a g m e n t s o f t h e r e c o m b i n a n t r e t r o v i r a l v e c t o rp L N C X ／i N O S b y t h er e

9、 s t r i c t i o ne n z y m e s w e r e c o i n c i d e n c e w i t h t h eg e n em a p p i n g a n a l y s i s ．3 ．1 6 a n t i ·G 4 1 8 p o s f f i v e c l o n e s C a n s t a b l y s y n t h e s i s a n d e x c r