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文檔簡介
1、本文旨在以明膠-硅氧烷納米粒子(GS NPs)為基礎,對其進行表面修飾,并考察其攜帶質粒DNA在細胞和動物水平的轉染效率。同時,利用變性試劑對HBV病毒樣核心顆粒在體外條件下進行解離與重組,考察其作為基因載體的潛力。本文工作主要分為以下三個方面:
1.適配體AGRO100能夠靶向識別A549細胞,引入聚乙二醇(PEG)作為橋聯劑連接明膠.硅氧烷納米粒子與適配體AGRO100,并延長了納米粒子在動物體內的血液循環(huán)時間。同時進
2、一步在納米粒子表面連接有助于納米粒子在細胞內逃逸溶酶體的多肽HA2。通過納米粒子修飾前后粒徑和表面電位的變化,證實了聚乙二醇(PEG)、適配體和HA2成功連接到納米粒子表面。通過靜電力吸附將DNA與GS NPs進行復合,然后進行上述的表面修飾,并通過瓊脂糖凝膠電泳證實該納米粒子能夠有效載負質粒DNA。
2.通過MTT實驗對明膠.硅氧烷納米粒子(GS NPs)、聚乙二醇和適配體修飾的明膠.硅氧烷納米粒子(GS-PEG-Apt
3、 NPs)和聚乙二醇、適配體和多肽HA2修飾的明膠-硅氧烷納米粒子(GS-PEG/HA2-Apt NPs)的細胞生物相容性進行了評價。通過激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀證實GS NPs,GS-PEG-Apt NPs和GS-PEG/HA2-Apt NPs均能夠進入A549細胞,但是GS-PEG-Apt NPs和GS-PEG/HA2-Apt NPs進入更多量,大約為GS NPs的兩倍。同時,通過活體成像技術觀測發(fā)現:功能化的納米粒子攜帶質粒D
4、NA能夠有效靶向到裸鼠的腫瘤部位,并能夠在腫瘤部位實現熒光素酶質粒PGL3的有效表達。
3.利用變性試劑尿素(Urea)、鹽酸胍(GdnHC1)或含EGTA和DTT的其他變性試劑來考察HBV病毒樣核心顆粒在體外解離與重組的性質。透射電鏡(TEM)觀測顯示,HBV病毒樣顆粒在合適濃度的變性試劑作用下能夠實現解離,且在移除變性試劑后均能很好地實現病毒樣顆粒的重組,且HBV病毒樣核心顆粒和多肽Tat修飾的HBV病毒樣核心顆粒進入
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