白介素10基因修飾骨髓源性肝干細(xì)胞移植治療大鼠肝纖維化的比較研究.pdf

1、目的：骨髓干細(xì)胞(bonemarrowstemcell，BMSC)容易采集，能自我更新，并具有向肝系細(xì)胞分化的能力，被認(rèn)為是用來補(bǔ)充丟失的肝細(xì)胞以治療肝臟疾病最具潛力的供體細(xì)胞。然而，肝纖維化的遷延病程使其在功能性肝細(xì)胞相對減少的同時(shí)，尚存在局部的炎癥損傷和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的過度沉積，且BMSC種類混雜，其向肝細(xì)胞分化具有局限性和不確定性，因此單純使用BMSC治療肝纖維化可能并不適宜。我們設(shè)想

2、運(yùn)用抗纖維化因子白介素10(Interleukin10，IL-10)基因修飾具有干細(xì)胞和肝細(xì)胞雙重特性的β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干細(xì)胞(bonemarrow-derivedliverstemcell，BDISC)可能益于肝纖維化的治療。本研究將腺病毒介導(dǎo)的IL-10基因(adenovirus-mediatedIL-10gene，AdIL-10)體外轉(zhuǎn)導(dǎo)BDLSC后，移植入肝纖維化大鼠的肝內(nèi)，評價(jià)IL-10基因修飾BDLSC對肝纖

3、維化的治療效果，旨在為轉(zhuǎn)基因BDISC移植治療肝纖維化的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)踐基礎(chǔ)。 方法：利用免疫磁珠細(xì)胞分選(magneticbeadcellsorting，MACS)方法分選大鼠β2m-/Thy-1+BDLSC，鑒定其肝相關(guān)性表型的表達(dá)。將AdIL-10體外轉(zhuǎn)導(dǎo)BDLSC，檢測IL-10的基因和蛋白表達(dá)水平，評價(jià)腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)對BDLSC的增殖能力和肝細(xì)胞樣表型白蛋白(albumin，ALB)表達(dá)的影響。將AdIL-10修

4、飾BDLSC經(jīng)門靜脈分支移植入四氯化碳(carbontetrachloride，CCl4)誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠體內(nèi)，通過觀察肝組織IL-10含量、肝臟炎癥反應(yīng)、肝細(xì)胞增殖情況、肝組織病理變化、膠原沉積面積、肝星狀細(xì)胞活化水平、ECM降解程度以及肝功能和凝血功能等，評價(jià)其對肝纖維化的影響，并與單純BDLSC移植進(jìn)行療效比較。 結(jié)果：MASC法能成功分選純化β2m-/Thy-1+BDLSC，其在基因和蛋白水平均表達(dá)肝細(xì)胞樣表型。AdI

5、L-10轉(zhuǎn)導(dǎo)BDLSC的效率呈劑量依賴性，最佳轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)為500pfu/cell。AdIL-10修飾BDLSC能夠高量表達(dá)IL-10基因，且持續(xù)高濃度分泌IL-10蛋白至胞外。AdIL-10轉(zhuǎn)導(dǎo)未影響B(tài)DLSC的正常增殖能力和ALB表達(dá)。AdIL-10修飾BDLSC經(jīng)門靜脈分支移植能順利種植于肝內(nèi)，有效提高肝組織IL-10水平，減輕肝臟炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)肝細(xì)胞增殖，抑制HSC活化，促進(jìn)ECM降解，修復(fù)肝組織病理損傷，減少膠原沉積及改善肝功能和