喹賽多對雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的藥動學(xué)-藥效學(xué)同步關(guān)系及臨床療效研究.pdf

1、雞壞死性腸炎是由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的以腸道黏膜出血性壞死為主要特征的消化道傳染病，具有較高的發(fā)病率和死亡率，給禽類養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p失。喹賽多作為喹噁啉類新品種藥物，對產(chǎn)氣莢膜梭菌有較好的抗菌活性，且灌服給藥后雞消化道內(nèi)藥物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血藥濃度，加之其毒副作用小，休藥期短，適宜用作雞壞死性腸炎的治療藥物，具有巨大開發(fā)潛能。本課題研究了喹賽多對雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的體外和半體內(nèi)抗菌作用及喹賽多在雞消化道內(nèi)的代謝動力學(xué)，通過建立喹賽多對雞源產(chǎn)氣莢

2、膜梭菌的半體內(nèi)PK-PD模型，制定了喹賽多用于治療雞壞死性腸炎的給藥方案，并按照基于PK-PD制定的給藥方案，開展了喹賽多對雞壞死性腸炎的隨機(jī)對照治療試驗，為指導(dǎo)喹賽多臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)與基礎(chǔ)實(shí)踐。
　　1.喹賽多對產(chǎn)氣莢膜梭菌的藥效學(xué)研究
　　參考臨床實(shí)驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)文件，采用瓊脂稀釋法測定喹賽多對61株雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的最小抑菌濃度(MIC)，使用SPSS軟件對MIC值進(jìn)行統(tǒng)計，計算得到喹

3、賽多對雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC50和MIC90。篩選出MIC50附近且致病性較強(qiáng)的菌株，采用微量稀釋法測定喹賽多在肉湯培養(yǎng)基和雞回腸內(nèi)容物中對該菌株的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，通過平板涂布法將濃縮至1010 CFU/mL的產(chǎn)氣莢膜梭菌菌液涂至含喹賽多的瓊脂平板測定防突變濃度(MPC)，采用藥物去除的方法測定喹賽多對產(chǎn)氣莢膜梭菌的抗菌后效應(yīng)(PAE)，分別用含有不同濃度喹賽多的培養(yǎng)基和各時間點(diǎn)采集的回腸內(nèi)容物進(jìn)行體外

4、和半體外殺菌曲線試驗。
　　結(jié)果表明喹賽多對61株雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC值介于1～16μg/mL，MIC50為2.11μg/mL，MIC90為4.40μg/mL，選取MIC50附近且致病性較強(qiáng)的菌株cvcc2030，在體外和半體內(nèi)條件下測得喹賽多對產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030的抗菌活性相同，MIC均為2μg/mL，MBC均為4μg/mL。喹賽多對產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030的MPC為20μg/mL，將產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030

5、暴露在不同濃度喹賽多溶液中1h和2h，誘導(dǎo)產(chǎn)生的PAE分別為0.88～1.24 h和1.01～1.89h。體外和半體內(nèi)殺菌曲線試驗結(jié)果均顯示喹賽多對產(chǎn)氣莢膜梭菌的抗菌作用類型為濃度依賴型。
　　2.喹賽多在雞消化道內(nèi)的藥動學(xué)研究
　　選用110羽4周齡三黃肉雞，隨機(jī)分為2組，每組55只，其中一組攻毒產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030，構(gòu)建壞死性腸炎疾病模型。疾病模型構(gòu)建成功后，對健康組和疾病組雞只均按30 mg/kg體重進(jìn)行單次灌

6、胃給藥。于給藥后0.5 h、0.75 h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24 h每個時間點(diǎn)分別取5只雞進(jìn)行定點(diǎn)宰殺，取其回腸內(nèi)容物，采用高效液相色譜法(HPLC)測定各時間點(diǎn)回腸內(nèi)容物中喹賽多的藥物濃度。
　　將測得的各時間點(diǎn)回腸內(nèi)容物中喹賽多的藥物濃度使用Winnonlin軟件進(jìn)行擬合，結(jié)果顯示健康組和患病組的AUC分別為410.75 hμg/mL和361.82 hμg/mL，Cmax分別為172.89μ

7、g/mL和151.76μg/mL，T1/2λ分別為5.69 h和5.82 h，CL/F分別為72.44mL/kg/h和82.27 mL/kg/h，MRT分別為2.59 h和2.49 h。表明雞灌服喹賽多后能在腸道達(dá)到較高濃度，但平均滯留時間較短，且健康組和患病組藥動學(xué)參數(shù)并無明顯差異。
　　3.半體內(nèi)PK-PD模型擬合與藥給藥方案制定
　　利用Sigmoid Emax方程對半體內(nèi)殺菌曲線試驗中AUC24h/MIC值與產(chǎn)氣莢膜

8、梭菌濃度變化對數(shù)值進(jìn)行擬合，計算當(dāng)E=0、-3、-4時PK/PD參數(shù)AUC24h/MIC折點(diǎn)值。采用平衡透析法得到喹賽多在雞消化道的游離藥物比例，結(jié)合給藥劑量公式:Dose=CL×(AUC/MIC)BP×MIC/F×fu，利用PK-PD參數(shù)AUC24h/MIC折點(diǎn)值計算達(dá)到預(yù)防、治療和根除效應(yīng)的日給藥劑量。
　　半體內(nèi)PK/PD模型擬合得到的方程為E=2.80-7.29×(AUC/MIC)1.76/36.271.76+(AUC/M

9、IC)1.76，當(dāng) E=0、-3、-4時計算得到的對應(yīng)的抑菌、殺菌、根除作用的AUC24h/MIC折點(diǎn)值分別為27.71 h、78.93 h、165.14h。測得喹賽多在雞消化道的游離藥物比例為0.47，結(jié)合給藥劑量公式，針對本試驗受試菌株，得到的預(yù)防、治療和根除雞壞死性腸炎的日給藥劑量為9.70、27.63、57.81 mg/kg，將日給藥劑量轉(zhuǎn)化為飼料添加劑量分別為100、300、600mg/kg。
　　4.隨機(jī)對照治療試驗<

10、br>　　將210羽3周齡科寶肉雞隨機(jī)分為6組:健康對照組35羽，不感染不給藥;陰性對照組35羽，感染不給藥;陽性對照組35羽，感染給予磷酸泰樂菌素預(yù)混劑200mg/kg飼料混飼給藥;試驗組根據(jù)基于PK/PD制定的給藥方案，低、中、高劑量組分別按150 mg/kg、300 mg/kg、600 mg/kg飼料混飼給藥，每組35羽。對各組的療效指標(biāo)、腸道損傷程度及產(chǎn)氣莢膜梭菌活菌菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計。
　　結(jié)果顯示喹賽多低、中、高劑量組的死

11、亡率分別為17.14％、11.43％、8.57％，有效率分別為77.14％、85.71％、91.43％，治愈率分別為71.43％、85.71％、91.43％，平均日增重分別為53.24 g、62.64 g、65.74g，料重比分別為2.19、2.00、1.94，腸道病變記分分別為0.97、0.69、0.54，產(chǎn)氣莢膜梭菌活菌菌落數(shù)(LogCFU/g)為6.25、5.45、4.67。喹賽多中、高劑量組各指標(biāo)間無顯著性差異，綜合各方因素，當(dāng)