葛根素對(duì)骨和子宮的作用及其對(duì)雌激素受體α、β和Ⅰ型膠原蛋白的影響.pdf

1、本文研究了葛根素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的影響，對(duì)胎鼠長(zhǎng)骨生長(zhǎng)及Ⅰ型膠原蛋白的影響，對(duì)小鼠子宮增殖及子宮和長(zhǎng)骨組織中兩種雌激素受體亞型(ERα和ERβ)蛋白水平的影響，為評(píng)價(jià)葛根素對(duì)骨及子宮的影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法：①將不同濃度的葛根素加入到大鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)基中，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的改變，考察葛根素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響；用MTT法考察葛根素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響；用磷酸苯二鈉(PNPP)法測(cè)定葛

2、根素對(duì)細(xì)胞內(nèi)外堿性磷酸酶(ALP)活性的影響。②取16天胎齡雌性小鼠尺骨，于含有10-6mol/L雌酚酮或10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L葛根素的BGJb培養(yǎng)基中旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)48h后，解剖顯微鏡下測(cè)量長(zhǎng)骨總長(zhǎng)和骨干長(zhǎng)，進(jìn)行H.E染色，光鏡下計(jì)數(shù)破骨細(xì)胞和肥大軟骨細(xì)胞，進(jìn)行Ⅰ型膠原免疫組織化學(xué)染色，圖像分析系統(tǒng)下測(cè)定長(zhǎng)骨生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞面積。③健康成熟雌性小鼠，分別給予乙烯雌酚或不同濃度的葛

3、根素，連續(xù)給藥7天，并進(jìn)行陰道上皮角化實(shí)驗(yàn)；給藥結(jié)束后處死，測(cè)定子宮重量系數(shù)；取子宮及骨組織做石蠟切片，進(jìn)行H.E染色，光鏡下觀察子宮內(nèi)膜厚度變化；進(jìn)行ERα、ERβ免疫組織化學(xué)染色，計(jì)數(shù)各組子宮內(nèi)膜區(qū)和長(zhǎng)骨骺板各區(qū)ERα和ERβ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，圖像分析處理系統(tǒng)下測(cè)定各組ERα和ERβ陽(yáng)性細(xì)胞面積。 研究結(jié)果：①大鼠成骨細(xì)胞經(jīng)葛根素或雌酚酮處理3天后，各組細(xì)胞均較空白對(duì)照組增殖明顯，細(xì)胞內(nèi)、外ALP活性也顯著增強(qiáng)。②經(jīng)葛根素和雌酚酮

4、處理后，胎鼠長(zhǎng)骨骨總長(zhǎng)和骨干長(zhǎng)均顯著性增加，骨化區(qū)破骨細(xì)胞數(shù)減少，肥大區(qū)軟骨細(xì)胞數(shù)增多，與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。在軟骨骺板，葛根素能顯著上調(diào)各區(qū)Ⅰ型膠原蛋白水平，并且當(dāng)葛根素濃度由10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L逐漸升高時(shí)，各區(qū)Ⅰ型膠原含量也逐漸升高，表現(xiàn)出劑量依賴(lài)的特點(diǎn)。③每天給予500mg/Kg和50mg/Kg葛根素，對(duì)子宮重量、內(nèi)膜厚度及子宮ERα蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響，但能顯著上調(diào)子宮ERβ蛋白的水

5、平。每天給予乙烯雌酚0.125mg/Kg則能刺激子宮內(nèi)膜增殖，同時(shí)上調(diào)子宮ERα及ERβ的表達(dá)。每天給予500mg/Kg葛根素，可上調(diào)小鼠長(zhǎng)骨生長(zhǎng)板ERα及ERβ的表達(dá)。 研究結(jié)論：①葛根素在體外能促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和分化，促進(jìn)骨形成，抑制骨吸收，可能通過(guò)促進(jìn)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞合成膠原蛋白來(lái)促進(jìn)軟骨內(nèi)成骨，從而促進(jìn)骨生長(zhǎng)。②葛根素也可能通過(guò)上調(diào)長(zhǎng)骨ERα及ERβ表達(dá)而對(duì)骨發(fā)揮有益作用。③葛根素對(duì)小鼠子宮增殖無(wú)明顯的刺激作用，這可能與其