生存素修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制小鼠肺纖維化.pdf

1、背景:特發(fā)性肺纖維化(IPF)是尋常型間質(zhì)性肺炎最常見(jiàn)的一種類(lèi)型，約占41％-71％。病變局限于肺部，主要以彌漫性的肺泡炎癥、肺泡結(jié)構(gòu)紊亂為主要病理表現(xiàn)，最終可導(dǎo)致肺纖維化，從而造成肺功能損害和呼吸困難。肺纖維化主要發(fā)生在間質(zhì)性肺炎、結(jié)締組織疾病引起的肺部并發(fā)癥以及急性呼吸窘迫綜合癥等疾病中，往往提示疾病預(yù)后不良。發(fā)病率逐年遞增，患者中位生存時(shí)間為2～5年，5年生存率更是低于50％，最重要的是，肺纖維化患者目前對(duì)常規(guī)治療反應(yīng)較差，骨髓間

2、充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，在受損傷肺中，可分化為肺泡上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞，有助于損傷修復(fù)，生存素是凋亡抑制基因家族成員之一，能在體內(nèi)體外抑制細(xì)胞凋亡，本文就攜帶GFP及survivin基因并經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染的BMSC對(duì)肺纖維化的作用進(jìn)行初步探討。
　　目的:研究經(jīng)尾靜脈移植攜帶生存素(survivin)基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)對(duì)小鼠肺纖維化的影響。
　　方法:體外構(gòu)建培養(yǎng)經(jīng)慢病毒GFP轉(zhuǎn)染并攜帶生存素基因的C57B

3、L/6小鼠BMSC-survivin以及經(jīng)慢病毒GFP轉(zhuǎn)染的C57BL/6小鼠BMSC，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)比較兩種細(xì)胞的體外凋亡率。6-8周齡C57BL/6小鼠48只，隨機(jī)分為3組，BMSC-survivin(A)，BMSC組(B)，模型組(C);博萊霉素5mg/kg氣管內(nèi)灌注制備小鼠肺纖維化模型。造模24h后，分別經(jīng)尾靜脈給予如下處理:A組注射BMSC-survivin，B組注射BMSC，C組注射生理鹽水。分別于第7、28天各處死8只[

4、1]。收集肺組織作病理學(xué)檢查;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肺表面蛋白A(surfaceprotein A，SP-A)的表達(dá);ELISA法測(cè)定血清中羥脯氨酸Hyp的含量;PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factorβ1，TGF-β1)和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases9，MMP-9)的mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果: BMSC及BMSC-survivin細(xì)胞凋亡率分別為(14.

5、466±1.953)％和(7.718±0.493)％，給予BMSC干預(yù)的小鼠肺組織病理改變較對(duì)照組輕，A、B、C組血清羥脯氨酸含量在第7天分別為(0.106±0.012)ug/ml、（0.245±0.009)ug/ml和（0.324±0.002)ug/ml，第28天分別為（0.457±0.006）ug/ml、（0.752±0.012）ug/ml和（1.372±0.035）ug/ml;A、B、C組肺組織SP-A表達(dá)第7天含量分別為0.71