H2O2及碘過量對MT-Ⅰ-ⅡKO小鼠脾臟的影響.pdf

1、一、H2O2對MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾臟的影響
　　 目的：腦缺血再灌注早期，脾臟中有大量炎癥介質(zhì)浸潤，導(dǎo)致腦缺血再灌注后脾細(xì)胞出現(xiàn)大量凋亡，嚴(yán)重影響腦缺血再灌注病人的預(yù)后。用H2O2誘導(dǎo)WT小鼠及MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞和線粒體，并觀察抗氧化劑NAC和SOD抑制劑DETC對其的干預(yù)作用。探討外源性H2O2對小鼠脾細(xì)胞活力的影響及NAC、DETC、MFⅠ/Ⅱ?qū)2O2誘導(dǎo)的脾細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用，為保護(hù)腦缺血再灌注后脾細(xì)胞

2、免受氧化應(yīng)激損傷尋求新的思路。
　　 方法：
　　 1.制備WT小鼠及MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞懸液，將細(xì)胞分為不同濃度H2O2(0，0.1，0.2，0.5，1，2mM)處理組，2h后MTT比色法檢測細(xì)胞活力;
　　 2.熒光探針MitoSOX對不同濃度H2O2(0，0.1，0.2，0.5，1，2mM)處理2h的脾細(xì)胞進(jìn)行染色，在熒光顯微鏡下對比觀察各濃度組熒光強度;
　　 3.在細(xì)胞水平上，用0.5m

3、M H2O2誘導(dǎo)WT小鼠及MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞，并分別用NAC、DETC作干預(yù)處理，2h后MTT比色法檢測細(xì)胞活力;
　　 4.分別檢測NAC、DETC處理的0.5mM H2O2誘導(dǎo)的WT小鼠及MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清LDH的活力;
　　 5.NAC、DETC處理0.5mMH2O2誘導(dǎo)的WT小鼠及MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞2h后，用熒光探針MitoSOX進(jìn)行染色，在熒光顯微鏡下對比觀察各組熒光強度

4、;
　　 6.在線粒體水平上，分別用NAC、DETC處理0.5mM H2O2誘導(dǎo)的脾細(xì)胞線粒體，通過紫外分光光度儀檢測線粒體的腫脹情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.無論在WT小鼠還是MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠，隨H2O2濃度增加脾細(xì)胞活力呈明顯下降趨勢(p＜0.05);但與WT小鼠相比，相同處理下MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞活力下降程度更加明顯(p＜0.05);
　　 2.無論在WT小鼠還是MT-Ⅰ/Ⅱ KO小

5、鼠，均隨H2O2濃度增加MitoSOX平均熒光強度逐漸增強;但與WT小鼠相比，相同處理下MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾細(xì)胞MitoSOX平均熒光強度更強;
　　 3.同組間與各自對照組相比，0.5mM H2O2組脾細(xì)胞活力明顯下降(p＜0.05)，LDH活力明顯增加(p＜0.05)，MitoSOX平均熒光強度增強;與0.5mM H2O2組相比，NAC+0.5mM H2O2組細(xì)胞活力是升高的(p＜0.05)，LDH活力是降低的(p＜0.

6、05)，且MitoSOX平均熒光強度是減弱的;MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠0.5mMH2O2組和NAC+0.5mM H2O2組分別與WT小鼠0.5mM H2O2組和NAC+0.5mM H2O2組相比，脾細(xì)胞活力是降低的(p＜0.05)，LDH活力是增加的（p＜0.05），MitoSOX平均熒光強度是增強的。
　　 4.同組間與各自對照組相比，0.5mM H2O2組線粒體吸光度值減小(p＜0.05)，提示線粒體腫脹增加;與0.5mM H

7、2O2組相比，NAC+0.5mM H2O2組線粒體吸光度值增加(p＜0.05); MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠0.5mM H2O2組和NAC+0.5mM H2O2組分別與WT小鼠0.5mM H2O2組和NAC+0.5mM H2O2組相比，線粒體吸光度值無明顯差別(p＞0.05)。
　　 5.同組間與各自對照組相比，0.5mM H2O2組、DETC組脾細(xì)胞活力降低(p＜0.05)，LDH活力增加（p＜0.05），MitoSOX平均熒光強

8、度增強;與0.5mMH2O2組相比，DETC+0.5mM H2O2組脾細(xì)胞活力下降明顯(p＜0.05)、LDH活力增加(p＜0.05)，MitoSOX平均熒光強度增強; MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠0.5mMH2O2組、DETC+0.5mM H2O2組和DETC組分別與WT小鼠0.5mMH2O2組、DETC+0.5mM H2O2組和DETC組相比，脾細(xì)胞活力下降(p＜0.05)，LDH活力增加(p＜0.05)，MitoSOX平均熒光強度增強。

9、
　　 6.同組間與各自對照組相比，0.5mM H2O2組線粒體吸光度值明顯減少(p＜0.05)，DETC組線粒體吸光度值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05);與0.5mM H2O2組相比，DETC+0.5mM H2O2組線粒體吸光度值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05);MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠0.5mM H2O2組、DETC+0.5mM H2O2組和DETC組分別與WT小鼠0.5mM H2O2組、DETC+0.5mM H2O2組和DETC組相

10、比，線粒體吸光度值無統(tǒng)計學(xué)差異(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.MT-Ⅰ/Ⅱ具有一定的保護(hù)作用。
　　 2.NAC能改善H2O2誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。
　　 3.DETC加重H2O2誘導(dǎo)的脾細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。
　　 二、碘過量對MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠脾臟的影響
　　 目的：觀察攝入過量碘對MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠外周免疫器官脾臟的影響，探討內(nèi)分泌免疫系統(tǒng)與MT-Ⅰ/Ⅱ的內(nèi)在

11、聯(lián)系。
　　 方法：
　　 隨機選取成熟健康MT-Ⅰ/Ⅱ KO小鼠和WT小鼠各20只，分別分為對照組和100KI組兩組，每組各10只，喂養(yǎng)14天后用于實驗。實驗前稱量小鼠體重，斷頸處死后取脾臟稱量重量，觀察脾臟大小并計算臟體比;做脾臟冰凍切片，用于HE染色，觀察脾臟結(jié)構(gòu)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 與對照組相比，100KI組脾臟體比和大小減?。╬＜0.05），可能出現(xiàn)了體液免疫應(yīng)答;與WT小鼠相比，MT-