氯化鋰通過上調(diào)α5β1整合素的基因表達(dá)抑制PC12細(xì)胞缺血缺氧型凋亡.pdf

1、目的:
　　觀察氯化鋰對(duì)缺氧PC12細(xì)胞凋亡的影響，明確氯化鋰的腦保護(hù)作用，為氯化鋰用于臨床缺血缺氧性疾病的治療提供理論依據(jù)及研究方向。
　　方法:
　　PC12細(xì)胞株由上海市中科院細(xì)胞庫提供，培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70％-80％時(shí)傳代，取生長對(duì)數(shù)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。將PC12細(xì)胞在缺氧環(huán)境下培養(yǎng)0h，12h，24h，36h后采用Annexin-v FITC/PI雙染流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)細(xì)

2、胞凋亡率;0h為對(duì)照組，12h，24h，36h為實(shí)驗(yàn)組，觀察凋亡高峰時(shí)間用于后期實(shí)驗(yàn)。
　　PC12細(xì)胞分為:A正常組，B缺氧組，C缺氧+氯化鋰治療組，D單獨(dú)氯化鋰組，四組不同方式培養(yǎng);采用Annexin-v FITC/PI雙染流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)細(xì)胞不同處理?xiàng)l件凋亡率的改變;CAM活細(xì)胞染色檢測(cè)細(xì)胞存活率;RT-PCR檢測(cè)Caspase-3，α5、β1整合素mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)組(12h，24h和3

3、6h) PC12細(xì)胞凋亡率及死亡率明顯高于對(duì)照組，[23.12±0.048，34.91±0.104，36.58±0.092與4.11±0.081;P＜0.05];36h組凋亡率較24h組稍有增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，[34.91±0.104與36.58±0.092; P＞0.05]。
　　2、缺氧引起PC12細(xì)胞凋亡率增加，[34.91±0.117與3.11±0.059; P＜0.05]和存活率的顯著降低[17.71±0.031與

4、90.11±0.035; P＜0.05]，同時(shí)引起PC12細(xì)胞表面表達(dá)Caspase-3增加和α5、β1整合素明顯減少。在缺氧前，應(yīng)用10 mmol/l氯化鋰預(yù)處理30min可阻斷缺氧引起的PC12細(xì)胞存活率的降低[17.71±0.031與57.58±0.066; P＜0.05]，顯著降低缺氧引起的PC12細(xì)胞凋亡率的增加[34.91±0.021與21.72±0.081; P＜0.05]，并阻斷缺氧引起的PC12細(xì)胞表達(dá)Caspase-