人前列腺癌相關(guān)基因UROC28功能的初步研究.pdf

1、目的:前列腺癌是目前最重要的危害歐美國(guó)家男性健康的腫瘤疾病,在中國(guó)發(fā)病率也呈上升趨勢(shì).前列腺癌腫瘤標(biāo)志物中,PSA的應(yīng)用最為廣泛,但并不十分完善.尋找一些敏感性高、特異性強(qiáng)的前列腺癌腫瘤標(biāo)志物一直是眾多學(xué)者的挑戰(zhàn).UROC28基因是2000年克隆并報(bào)告的一個(gè)新基因,在正常和良性前列腺增生組織(BPH)中僅有少量UROC28表達(dá),在前列腺癌組織中則有明顯高的表達(dá),而在轉(zhuǎn)移性前列腺癌中表達(dá)量最高,隨著Gleason分級(jí)的增高而升高.另外在血

2、清樣品進(jìn)行了UROC28蛋白的western blot檢測(cè),正常組與PCa組比較,均具有極顯著差異(P<0.0001),這些初步結(jié)果提示,UROC28很有可能單獨(dú)或與其他指標(biāo)如PSA聯(lián)合使用,成為新的腫瘤標(biāo)志物.研究UROC28的功能,顯然具有很大意義,該實(shí)驗(yàn)將對(duì)此作初步的探索.方法:該實(shí)驗(yàn)共分七個(gè)部分完成:1.利用生物信息學(xué)分析方法分析UROC28基因和UROC28蛋白.2.PCR獲得UROC28片段后,插入質(zhì)粒,構(gòu)建pRSET-UR

3、OC28原核表達(dá)載體,并在BL21工程菌中表達(dá),摸索高表達(dá)所需試驗(yàn)條件.利用Ni<'2+>-NTA樹脂純化UROC28蛋白.3.免疫新西蘭白兔制備并純化兔抗UROC28多克隆抗體.4.構(gòu)建pcDNA-UROC28真核表達(dá)載體,并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞.在人胚腎細(xì)胞系HEK293細(xì)胞和前列腺癌細(xì)胞系PC-3細(xì)胞中觀察UROC28過表達(dá)對(duì)真核細(xì)胞的生物學(xué)作用.5.構(gòu)建pWH1-UROC28干涉載體,并在前列腺癌細(xì)胞系PC-3細(xì)胞中觀察干涉UROC