大黃酸-哌嗪雌酚酮抗骨質(zhì)疏松活性及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：觀察大黃酸-哌嗪雌酚酮(Lc)對(duì)去卵巢大鼠骨量、骨強(qiáng)度和形態(tài)微結(jié)構(gòu)、骨羥脯氨酸和鈣含量以及對(duì)子宮增殖的影響，評(píng)價(jià)大黃酸-哌嗪雌酚酮抗骨質(zhì)疏松活性；檢測(cè)骨和子宮組織中ERα、ERβ mRNA的表達(dá)水平，從受體角度探討Lc抗骨質(zhì)疏松活性及對(duì)子宮的可能作用機(jī)制。 方法：6月齡Wistar雌性未孕大鼠72只，按體重隨機(jī)分為6組：假手術(shù)組(Sham)、模型組(OVX)、雌酚酮組(E)、Lc高劑量組(H-Lc)、Lc中劑量組(M-Lc

2、)、Lc低劑量組(L-Lc)，各組均經(jīng)背側(cè)入路行雙側(cè)卵巢切除，Sham組僅切除卵巢旁少量脂肪組織，術(shù)后一周灌胃給藥，E組給予雌酚酮1.07mg/kg·d，H-Lc、M-Lc和L-Lc組分別給予Lc1.028mg/kg·d、0.514mg/kg·d和0.257mg/kg．d， Sham、OVX組給予等體積溶媒液。灌胃給藥24周后，雙能骨密度儀全身掃描測(cè)定大鼠活體骨密度；處死大鼠，收集血液，測(cè)量血清雌二醇濃度；取子宮，稱重并計(jì)算子宮系數(shù)，取

3、約1cm長(zhǎng)子宮組織，HE染色作形態(tài)學(xué)觀察；取左側(cè)股骨遠(yuǎn)端干骺端行骨計(jì)量學(xué)測(cè)定，右側(cè)股骨行骨生物力學(xué)測(cè)定，斷裂后經(jīng)水解行羥脯氨酸和骨鈣含量測(cè)定；剩余子宮及右側(cè)脛骨近端液氮速凍后轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱中保存，RT-PCR．技術(shù)檢測(cè)ERα、ERβmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：1．骨密度和骨礦含量變化：卵巢切除使大鼠全身及各部位骨密度和骨礦含量明顯下降(P<0.01)；三種劑量的Lc和雌酚酮一樣，均明顯提高大鼠全身及脊柱、肋骨、骨盆骨密度和骨

4、礦含量(P<0.01)，低劑量Lc同時(shí)提高頭部骨密度和上肢骨密度(P<0.01)。2.股骨生物力學(xué)改變：去卵巢后，大鼠股骨最大壓縮載荷、最大壓縮應(yīng)力、彈性模量均明顯降低(p<0.05)；給予雌酚酮后，提高股骨的最大壓縮載荷、最大壓縮應(yīng)力、彈性模量、斷裂時(shí)載荷、斷裂時(shí)應(yīng)力；三種劑量的Lc均提高股骨最大壓縮載荷、最大壓縮應(yīng)力、斷裂時(shí)載荷、斷裂時(shí)應(yīng)力，各組之間無明顯差異，L-Lc組彈性模量亦明顯增加。3.股骨羥脯氨酸和骨鈣百分含量變化：去卵巢

5、大鼠股骨羥脯氨酸百分含量下降；三個(gè)不同劑量Lc和雌酚酮能明顯提高羥脯氨酸百分含量(p<0.05)；各組骨鈣百分含量同OVX組無明顯差異(P>0.05)。4.股骨遠(yuǎn)端形態(tài)學(xué)觀察及計(jì)量學(xué)測(cè)量：去卵巢組大鼠股骨遠(yuǎn)端骺板下骨小梁結(jié)構(gòu)排列稀疏，連接性差，總量明顯減少(p<0.01)，出現(xiàn)大量骨小梁盲端，計(jì)量學(xué)指標(biāo)顯示骨轉(zhuǎn)換增高。雌酚酮和三種劑量Lc能明顯提高去卵巢大鼠骨小梁體積(p<0.01)；計(jì)量學(xué)指標(biāo)三種劑量Lc抑制去卵巢后骨的高轉(zhuǎn)換狀態(tài)。5

6、.血清雌二醇改變：與Sham組比較，OVX組明顯降低，雌酚酮和高、中劑量Lc可使大鼠去卵巢后血清雌二醇明顯升高(P<0.01)，低劑量組與OVX組無明顯差別(p>0.05)。6.子宮系數(shù)及形態(tài)學(xué)改變：大鼠去卵巢后子宮明顯萎縮，子宮重量、子宮系數(shù)、子宮直徑、內(nèi)膜厚度明顯減少，雌酚酮能夠促進(jìn)子宮增生，重量增加，內(nèi)膜明顯增厚(P<0.01)，三種劑量Lc對(duì)子宮內(nèi)膜增生無明顯刺激作用，子宮重量、子宮系數(shù)、子宮直徑、內(nèi)膜厚度與OVX組無明顯差別(

7、p>0.05)。7.Lc對(duì)脛骨近端ERα、ERβmRNA表達(dá)的影響：Sham組脛骨近端ERαmRNA和ERβmRNA均有表達(dá)；而OVX組僅檢測(cè)到ERβmRNA的表達(dá)，相對(duì)表達(dá)水平低于Sham組；E組檢測(cè)到ERα、βmRNA的表達(dá)，ERβmRNA的表達(dá)水平高于OVX組，ERαmRNA和ERβmRNA水平均與Sham組無差異；H-Lc、M-Lc、L-Lc組僅檢測(cè)到ERβmRNA的表達(dá)，各組之間無明顯差異，相對(duì)表達(dá)量高于OVX組，但均低于E和

8、Sham組。8．大黃酸-哌嗪雌酚酮對(duì)子宮ERα、ERβmRNA表達(dá)的影響：各組均檢測(cè)到ERα mRNA的表達(dá)，OVX組表達(dá)水平明顯低于Sham組；E組表達(dá)水平高于OVX組，與Sham組無明顯差別；Lc各組與OVX組之間ERα mRNA表達(dá)無明顯差異，但均低于E和Sham組；Sham、E、H-Lc、M-Lc四組檢測(cè)到ERβ mRNA的表達(dá)；OVX、L-Lc組未檢測(cè)出ERβ mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：1．實(shí)驗(yàn)三個(gè)劑量Lc對(duì)去卵巢大鼠均