中藥海馬的鑒定及抗骨質疏松活性研究.pdf

1、海馬(Hippocampus)是一種隸屬于海龍科海馬屬的重要小型海洋硬骨魚類，在熱帶或亞熱帶的淺海海域分布較廣泛。作為一種名貴的海洋中藥，現(xiàn)代醫(yī)學證明海馬具有抗腫瘤，鎮(zhèn)痛，抗衰老，抗疲勞，抗血栓以及性激素樣作用等。
　　我們在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，市場流通的海馬藥材種類較為混亂，質量參差不齊，存在以次充好，品種不分等現(xiàn)象。棘海馬和刺海馬也存在混淆情況，多數(shù)文獻也未對它們進行明確區(qū)分?；诖耍斜匾煤ｑR的化學或分子生物學信息，建立中藥海馬

2、的科學鑒別方法，對其進行準確鑒定，進行質量評價與控制具有重要意義。
　　中醫(yī)認為海馬有溫腎壯陽，散節(jié)消腫之功效。海馬民間傳統(tǒng)用于治療跌撲損傷，根據(jù)腎主骨理論，提示海馬可能具有抗骨質疏松活性，我們前期實驗及文獻也證實了這一點，因此我們對中藥海馬進行基于小分子甾醇類化合物的高效薄層色譜鑒定與基于線粒體COI和Cytb基因的分子鑒定研究，并對中藥海馬進行基于體外細胞學實驗的抗骨質疏松活性研究。
　　1、中藥海馬的高效薄層色譜研究<

3、br>　　以十批不同產(chǎn)地的海馬藥材為研究對象，采用高效薄層色譜鑒定，通過對不同提取方式，提取溶劑，點樣量，顯色劑、展開劑、薄層板等條件的系統(tǒng)考查，最終確定以膽甾-4-烯-3-酮，膽甾醇為對照品，以5種海馬為對照藥材，采用HPTLC Silcon Gel60高效薄層板，以石油醚∶乙酸乙酯=4∶1為展開劑系統(tǒng)，10％硫酸乙醇顯色，顯示最為豐富和清晰的色譜條帶，為海馬的混偽品鑒別及質量控制提供依據(jù)。
　　2、基于DNA條形碼技術對刺海馬

4、和棘海馬的分子鑒定
　?、倩诰€粒體COI基因對三斑海馬進行了分子鑒定，建立海馬基于線粒體COI基因的分子鑒別方法。通過系統(tǒng)考察明確DNA提取的最優(yōu)方法為試劑盒法，并優(yōu)化了PCR擴增體系以及參數(shù)。為易混淆品種刺海馬與棘海馬的鑒定提供科學依據(jù)。
　　②對六個批次的市售刺海馬樣品，進行基于線粒體Cytb基因的分子鑒定，結果顯示3種為刺海馬，2種為棘海馬，1種產(chǎn)自菲律賓的為高冠海馬，鑒定結果與我們之前的性狀鑒定結果完全一致，即市場

5、上作為刺海馬出售的真實來源為棘海馬Hippocampusspinosissimus Weber。我們建議將藥典中收載的刺海馬修訂為棘海馬Hippocampusspinosissimus Weber?；诰€粒體cytb基因對棘海馬和刺海馬進行分子鑒定，結合形態(tài)學證據(jù)，鑒定結果支持將藥典原記載的刺海馬修訂為棘海馬。
　　3、中藥海馬抗骨質疏松的活性研究
　　以新生SD大鼠顱蓋骨成骨細胞為體外抗骨質疏松篩選模型，對五種海馬乙醇提取