與牙周膜成纖維細胞間接共培養(yǎng)對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化影響.pdf

1、【實驗目的】
　　本實驗旨在觀察通過與牙周膜成纖維細胞（Periodontal ligament fibroblasts，PDLFs）間接共培養(yǎng)，誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）向PDLFs分化的可行性。初步探討PDLFs誘導BMSCs分化的機制：細胞間接觸是否為必要條件，如果不接觸能否誘導BMSCs定向分化？從而為BMSCs在體內(nèi)分化提供一定的理論依據(jù)，

2、為BMSCs作為牙周組織工程種子細胞的體外誘導分化條件提供一條新的思路。
　　【內(nèi)容及方法】
　　采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)大鼠BMSCs，通過觀察細胞形態(tài)及生長特性、生長曲線、成骨及成脂肪誘導對其進行鑒定；酶消化法結(jié)合組織塊法培養(yǎng)大鼠PDLFs，通過波形絲蛋白、角蛋白免疫細胞化學染色及礦化誘導進行鑒定。建立間接共培養(yǎng)模型，設(shè)間接共培養(yǎng)BMSCs組（將BMSCs與PDLFs按1：1比例進行體外非接觸式共培養(yǎng)），并設(shè)單獨培養(yǎng)BMSC

3、s組與單獨培養(yǎng)PDLFs組為對照組。分別于共培養(yǎng)后的第3、5天，檢測以上3組細胞的堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）活性。于共培養(yǎng)第14天，終止培養(yǎng)。用半定量RT-PCR方法檢測3組細胞的骨鈣素（Osteocalcin，OCN）、骨涎蛋白（Bone sialoprotein，BSP）、Ⅲ型膠原（Collagen type Ⅲ，COLⅢ）、Runx2的mRNA表達水平。
　　【結(jié)果】
　　間接共培養(yǎng)

4、后BMSCs被誘導為牙周膜成纖維樣細胞，表現(xiàn)出一些類似PDLFs的性質(zhì)，包括ALP活性的降低，OCN、COLⅢ、Runx2mRNA表達水平的升高以及BSPmRNA表達水平的降低。間接共培養(yǎng)組BMSCs的各檢測指標與單獨培養(yǎng)PDLFs組無統(tǒng)計學差別，與單獨培養(yǎng)BMSCs組有統(tǒng)計學差別。
　　【結(jié)論】
　　通過體外非接觸式共培養(yǎng)也可以誘導BMSCs向PDLFs分化。細胞間直接接觸反應并非誘導BMSCs向PDLFs分化的必要條件，