基因組芯片制備及其在篩選腫瘤相關(guān)基因中的應(yīng)用研究.pdf

1、惡性腫瘤,是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的一種高危常見(jiàn)病.腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的多階段過(guò)程,不僅涉及到多種腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)失常,而且涉及基因組的重排.尋找新的腫瘤相關(guān)基因是目前全世界生命科學(xué)研究中的一個(gè)熱點(diǎn)和難點(diǎn).傳統(tǒng)的方法基本是分別對(duì)單個(gè)基因進(jìn)行研究,然而在生理和病理狀態(tài)下,每一個(gè)基因都不是單獨(dú)起作用的.因此,要揭示腫瘤在基因水平的本質(zhì),更有必要從基因組整體來(lái)研究.20世紀(jì)90年代誕生的DNA芯片技術(shù),使得這種必要成為可能. 該研究以K56

2、2細(xì)胞和人外周血白細(xì)胞(WBC)為材料,利用限制性顯示和分子克隆技術(shù),分別構(gòu)建了K562細(xì)胞和健康人WBC基因組DNA片段文庫(kù).并用PCR技術(shù)分別擴(kuò)增出400多個(gè)基因組DNA片段,以純化的PCR產(chǎn)物做探針,制備了K562細(xì)胞和健康人白細(xì)胞基因組DNA芯片.然后,分別抽提K562細(xì)胞和正常人WBC基因組DNA,用Sau3AI酶切,并將酶切產(chǎn)物加上人工接頭,用限制性標(biāo)記技術(shù),標(biāo)記上熒光標(biāo)記物Cy3,將標(biāo)記好的K562細(xì)胞基因組片段和WBC基

3、因組片段分別與制備的基因組芯片雜交.芯片雜交結(jié)果經(jīng)掃描分析發(fā)現(xiàn)K562細(xì)胞腫瘤特異性基因42個(gè),正常人WBC特異性基因16個(gè).進(jìn)一步序列分析證實(shí),在K562腫瘤細(xì)胞特異性基因中有一個(gè)為BCR(breakpointcluster gene)基因,另外還有部分轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)相關(guān)基因.研究結(jié)果表明,我們自制的K562細(xì)胞基因組和正常人WBC基因組DNA芯片,可以成功地直接應(yīng)用于篩選腫瘤相關(guān)基因,為基因組水平研究腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制提供了新的技術(shù)手段,