中國重慶AIS遺傳流行病學(xué)調(diào)查和SH3GL1序列比對分析研究.pdf

1、目的：一是對中國重慶AIS進行遺傳流行病學(xué)調(diào)查分析，探討遺傳因素在發(fā)病中的作用和可能的遺傳模式。二是采取定位候選克隆方法對AIS的疾病候選基因SH3GL1的外顯子進行序列比對分析，研究是否存在堿基變異，為疾病基因篩查與鑒定做方法學(xué)準(zhǔn)備。 方法： 1.遺傳流行病學(xué)調(diào)查：設(shè)計AIS遺傳流行病學(xué)調(diào)查表，收集在西南醫(yī)院診治過的先證者資料。確立診斷標(biāo)準(zhǔn)為站立前后位X線片Cobb角＞10°為受累者，Cobb角＜10° 為易感

2、者，年齡小于12歲的表型正常者為未確定者。由經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查員對先證者及其家系成員進行詢問調(diào)查并填寫調(diào)查表。方法為門診、病房詢問與電話詢問相結(jié)合，為防止存在回憶偏倚對先證者、父親和母親分別進行詢問記錄。對懷疑受累者和易感者要進行臨床望診、Adam彎腰試驗檢查，必要時經(jīng)過X線片檢查確定。 2.遺傳流行病學(xué)統(tǒng)計分析：對遺傳流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析。通過年齡發(fā)病率分析，家族聚集性分析，遺傳度計算(Falcon

3、er法)分析確定遺傳因素的大小。根據(jù)單基因和多基因遺傳病的特點分析確定遺傳模式。 3.定位候選克?。涸O(shè)計以家系為基礎(chǔ)的“病例同胞對”研究方案，采集“同胞對”的血液標(biāo)本，提取基因組DNA，根據(jù)基因SH3GL1核酸序列，以10個外顯子為重點設(shè)計引物對，進行PCR擴增、克隆和測序。 4.序列比對分析：用GeneTool軟件對外顯子測序結(jié)果，進行“同胞對”之間和同胞對與NCBI之間的序列比對分析，判斷是否存在堿基變異，并進行蛋白

4、質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測分析。 結(jié)果： 1.遺傳流行病學(xué)調(diào)查：設(shè)計了AIS遺傳流行病學(xué)調(diào)查表，并成功的對73個家系按調(diào)查表進行遺傳流行病學(xué)調(diào)查。 2.遺傳流行病學(xué)統(tǒng)計：年齡發(fā)病率分析：發(fā)病75％在11～14歲之間，平均年齡10.84歲。家族聚集性分析：病例家族總發(fā)病率為4.86％，一級親屬的發(fā)病率為16.93％，二級親屬的發(fā)病率為7.21％，三級親屬發(fā)病率4.36％，而參照發(fā)病率為2.25％，統(tǒng)計學(xué)分析差異有顯著意義(u=6.

5、451，P＜0.01)。遺傳度計算：先證者一級親屬的遺傳度84％、二級親屬的遺傳度88％和三級親屬的遺傳度85％，經(jīng)顯著性檢驗(P＜0.01)各級親屬遺傳度有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.定位候選克?。汉蜻x基因SH3GL1中的10個外顯子成功的在AIS“同胞對”的基因組DNA中得到擴增和克隆，并且序列測定均取得陽性結(jié)果。 4.序列比對分析：通過比對分析在候選基因SH3GL1的10個外顯子中，共發(fā)現(xiàn)12處堿基變異，分別位于第2(2處)

6、、4、5(3處)、6、8和10(2處，非編碼區(qū))六個外顯子上。其中先證者基因編碼mRNA第515位堿基如果為T，則形成終止密碼子(TAG)，導(dǎo)致蛋白閱讀框發(fā)生改變(可能為107-518區(qū)域堿基，或為707-1213堿基)，蛋白質(zhì)序列預(yù)測分析顯示編碼截短蛋白，從而影響蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。 結(jié)論： 1.AIS是遺傳?。耗挲g發(fā)病率分析顯示75％在11～14歲之間，比較集中，屬于遺傳病的特點；病例家族發(fā)病率和先證者一級親屬、二級親

7、屬和三級親屬的發(fā)病率均明顯高于參照群體平均發(fā)病率，具有明顯的家族聚集性；一級、二級和三級親屬的遺傳度均大于84％，證明AIS與遺傳顯著相關(guān)。綜合上述分析結(jié)果證明AIS是遺傳病。 2.AIS是多基因遺傳?。合茸C者的各級親屬發(fā)病率均明顯高于參照人群發(fā)病率； 同胞發(fā)病率遠(yuǎn)比1/2或1低；與先證者的親緣關(guān)系越近，發(fā)病率越高，有明顯的家族性聚集傾向。綜合分析證明AIS屬于多基因遺傳病。 3.基因SH3GL1是MS的致病基因