大鼠在體心臟心肌缺血后處理模型的研究.pdf

1、目的：通過建立大鼠在體心臟心肌缺血再灌注損傷(Myocardial Ischemia Reperfusion Injury，MIRI)模型，采用不同時間的缺血后處理(ischemic postconditioning，IPO)，觀察大鼠心肌梗死面積、心肌酶、心電圖及血流動力學的變化，尋找產(chǎn)生最佳心肌保護作用的大鼠在體心臟缺血后處理方式，建立穩(wěn)定的大鼠在體心臟缺血后處理模型。
　　 方法：選擇81只250-300克實驗用Sprag

2、ue-Dawley(SD)大鼠(雄性)，隨機分成9組：I/R組(缺血再灌注損傷組，n=9)，阻斷冠狀動脈左前降支(1eft anterior descending,LAD)40分鐘，再灌注120分鐘；缺血預處理組 (ischemic preconditioning，IPC，n=9)，三次短暫阻斷/再通LAD(閉塞5分鐘，再灌注10分鐘，循環(huán)三次)，阻斷LAD40分鐘，再灌注120分鐘；IP0組(缺血后處理組)，分為六個亞組，于阻斷LAD

3、40分鐘后分別行3次不同時間的IPO：(A)IPO AI-p3-10s組(n=9)：再通10秒，阻斷10秒，重復三次，再灌注120分鐘；(B)IPO AI-p3-20s組(n=9)：再通20秒，阻斷20秒，重復三次，再灌注120分鐘；(C)IPO AI-p3-30s組(n=9)：再通30秒，阻斷30秒，重復三次，再灌注120分鐘；(D)IPO AI-p3-40s組(n=9)：再通40秒，阻斷40秒，重復三次，再灌注120分鐘；(E)IP

4、O AI-p3-50s組(n=9)：再通50秒，阻斷50秒，重復三次，再灌注120分鐘；(F)IPO AI-p3-60s組(n=9)：再通60秒，阻斷60秒，重復三次，再灌注120分鐘；NC組(空白對照組，n=9)。所有動物術(shù)前禁食、水4小時，全麻后仰臥位固定，連接四肢心電電極，氣管切開，呼吸機輔助，胸部正中切口，剪開胸骨，顯露心臟。所有動物第一次阻斷LAD前分別給予肝素500單位/公斤，以防止血栓形成，經(jīng)胸廓壁在左室心尖部無血管區(qū)置入

5、穿刺套管針，連接壓力傳感器及監(jiān)測儀，記錄心電圖及左室內(nèi)壓變化。觀測指標：1 血清生化指標：① CK-MB測定：各組于冠狀動脈再灌注前15分鐘和120分鐘末分別從頸動脈取血，在全自動生化分析儀上測定CK-MB。② SOD測定：各組于冠狀動脈再灌注前15分鐘和120分鐘末分別從頸動脈取血，分離血清，-20℃保存待測。2 心肌梗死面積測定：取血畢，迅速取下心臟，原位阻斷LAD，經(jīng)主動脈逆灌Even’s藍，分離出左室心肌行橫切片，TTC法染色，

6、分離壞死區(qū)與非壞死區(qū)后稱重，梗死范圍以壞死心肌質(zhì)量占缺血心肌質(zhì)量的百分比表示。3 血流動力學指標：在LAD阻斷前15 min、LAD再灌注15 min、60 min、120 min，共4個時間點，分別用RM6240C生理信號采集系統(tǒng)記錄心率(HR)、左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左心室內(nèi)壓上升最大速率(+dp/dtmax)和左心室內(nèi)壓下降最大速率(-dp/dtmax)的波形及數(shù)值，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示

7、,用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理。
　　 結(jié)果：1 血清生化指標：① CK-MB測定結(jié)果表明：CK-MB基礎(chǔ)水平在各組并無差別。在再灌注120分鐘血CK-MB水平在IR組、IPC組、IPO組各亞組均較同時刻空白對照組顯著升高，表明各組均存在缺血再灌注損傷，但IPC組及IP0組各亞組均低于IR組(P<0.05)，且IPO各亞組之間、IPC組與IPO各亞組之間均無明顯差別，提示3輪10秒、20秒、30秒、40秒、50

8、秒、60秒的后處理具有減輕心肌缺血再灌注損傷的作用。② SOD測定結(jié)果表明：SOD基礎(chǔ)水平在各組并無差別。在再灌注120分鐘IPC組與IPO組各亞組血SOD含量較同時刻對照組均顯著降低，IPC組與IPO組各亞組均高于IR組 (P<0.05)，但IPO各亞組之間、IPC組與IPO各亞組之間均無明顯差別。2 心肌梗死范圍結(jié)果表明：IPC組、IPO組各亞組心肌梗死范圍均低于IR組(P<0.05)；IPO組各亞組之間，IPO AI-p3-40s

9、組心肌梗死范圍低于其余5組后處理組(P<0.05)；IPO組各亞組與IPC組之間，IPO AI-p3-40s組心肌梗死范圍與IPC組無顯著差別(p>0.05)，其余5組后處理組心肌梗死范圍均高于IPC組(P<0.05)，提示40秒的缺血后處理相比其它5組后處理能進一步減少心肌梗死范圍，與IPC之間無差別(p>0.05)。3 血流動力學變化：缺血前各組動物的HR、LVDP、LVEDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax之間無差別。各組

10、HR、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax在再灌注15min內(nèi)下降最明顯，隨再灌注時間的延長逐漸回升。再灌注15min時：IPC組與IPO各亞組HR均高于I/R組(P<0.05)，IPO各亞組之間、IPC組與IPO各亞組之間，差異均不顯著(p>0.05)；IPC組與IPO各亞組LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax高于I/R組(P<0.05)，IPO組各亞組之間，IPO AI-p3-40s組LVDP、+dp/dtm

11、ax、-dp/dtmax要高于其余5個后處理組(P<0.05)；IPO組各亞組與IPC組之間，IPO AI-p3-40s組與IPC組差異不顯著(p>0.05)，其余5組后處理組均低于IPC組。再灌注60min、120 min時：IPC組與IPO各亞組HR、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax高于I/R組(P<0.05)，IPO組各亞組之間，IPO AI-p3-40s組HR、LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax要高

12、于其余5個后處理組；IPO組各亞組與IPC組之間，IPO AI-p3-40s組與IPC組差異不顯著(p>0.05)，其余5組后處理組均低于IPC組(P<0.05)。各組LVEDP，在心臟恢復灌注15 min之內(nèi)上升最明顯，以后隨再灌時間延長，LVEDP逐漸下降，IPO各組及IPC組在再灌注15min、60min、120 min均低于I/R組(P<0.05)，IPO組各亞組之間，IPO AI-p3-40s組再灌注15min、60min、1

13、20 min時的LVEDP低于其它5組后處理組(P<0.05)；IPO組各亞組與IPC組之間，IPO AI-p3-40s組與IPC組差異不顯著(p>0.05)，其余5組后處理組均高于IPC組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1 缺血再灌注損傷破壞心肌細胞，導致細胞壞死，影響心肌功能。2 心肌缺血預處理、心肌缺血后處理均可減輕再灌注損傷，提高對氧自由基的清除能力，縮小梗死范圍，改善心肌收縮及舒張功能。3 缺血后再灌注前3輪六種不同時