不同強(qiáng)度周期性壓力對組織工程軟骨的影響.pdf

1、目的：在周期性壓力環(huán)境下進(jìn)行組織工程軟骨的體外構(gòu)建，探討不同強(qiáng)度的周期性壓力對組織工程軟骨構(gòu)建的影響。 方法：處死出生3-5天新西蘭兔4只，酒精浸泡消毒后取四肢關(guān)節(jié)軟骨。將軟骨剪碎至約1mm<'3>大小，用0.25％的胰蛋白酶和0.2％的Ⅱ型膠原酶依次消化后獲取軟骨細(xì)胞。體外擴(kuò)增培養(yǎng)至第二代后，收集細(xì)胞。將軟骨細(xì)胞分別接種于5mm×5mm大小的PLGA無紡網(wǎng)支架，待細(xì)胞充分貼壁后，隨機(jī)分為四組，每組10個支架。其中三組為實(shí)驗(yàn)組，

2、置于由HFB-40型旋轉(zhuǎn)式生物反應(yīng)器和往復(fù)式加壓泵組成的“周期性加壓培養(yǎng)系統(tǒng)"內(nèi)培養(yǎng)，分別施加強(qiáng)度為0～50Kpa、0～100Kpa、0～200Kpa，頻率0.1Hz的周期性壓力，另一組不加壓，為對照組。所有細(xì)胞-支架復(fù)合物培養(yǎng)2周后，肉眼觀察所獲組織工程軟骨的外觀，HE染色觀察各組軟骨細(xì)胞的形態(tài)及分布，甲苯胺藍(lán)染色觀察各組軟骨細(xì)胞糖氨多糖(GAG)分泌，Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色方法觀察各組軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原分泌，檢測三組周期性壓力組和對

3、照組的組織工程軟骨Ⅱ型膠原和糖氨多糖(GAG)含量。 結(jié)果:200KPa組工程軟骨體積最大，最厚，表面光滑，有光澤，彈性好。HE染色可見軟骨細(xì)胞增殖最旺盛，排列緊密，分布均勻，細(xì)胞被大量ECM包圍，融合成片，可見軟骨陷窩。甲苯胺藍(lán)染色可見切片紫藍(lán)著色，顏色很深，質(zhì)地較密，分布均勻。Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色陽性顯色，呈棕黃色，采用圖像分析系統(tǒng)對棕黃色染色面積計(jì)數(shù)，Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色可見Ⅱ型膠原染色面積百分比最高(82.44±

4、1.87％,p<0.01)，GAG含量最高(476.33±25.66μg,p<0.01)。100KPa組和50KPa組次之。對照組組織工程軟骨體積較小，厚度較薄，表面欠光整，質(zhì)軟，彈性差。HE染色可見細(xì)胞分布散亂，ECM較少，未融合成片。甲苯胺藍(lán)染色可見著色較淺，分布不均。Ⅱ型膠原染色面積百分比最低(41.05±6.28％,P<0.01)，GAG含量最低(220.00±12.14μg,p<0.01)。 結(jié)論：組織工程軟骨細(xì)胞增殖