Prader-Willi綜合征臨床表型、生長激素受體基因外顯子3多態(tài)性及早期篩查和干預(yù)的多中心研究.pdf

1、第一部分Prader-Willi綜合征的臨床表型分析及中外比較
　　目的:Prader-Willi綜合征(PWS)的臨床表型復(fù)雜多樣，并隨年齡增長而變化。1993年由Holm等人提出了PWS的臨床診斷標準，并一直沿用至今。PWS的分子遺傳學(xué)診斷方法也日益成熟，尤以甲基化分析方法中的甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MS-PCR)及甲基化特異性多重連接依賴的探針擴增(MS-MLPA)技術(shù)應(yīng)用最為廣泛。國內(nèi)對PWS的研究資料較少，對我國PWS

2、的發(fā)病情況、分子遺傳機制、臨床表型特點和分子診斷學(xué)策略知之甚少。本研究旨在分析我國PWS患兒的臨床表型特征，并與國內(nèi)外的相關(guān)研究進行比較，同時對我國PWS患兒的不同分子遺傳機制進行鑒別，探討基因型與臨床表型間的關(guān)系，為臨床早期篩選及進一步行分子遺傳學(xué)診斷提供幫助。
　　方法:以2007年1月至2012年6月間臨床懷疑或診斷為PWS的70例患兒為研究對象，采用MS-PCR方法進行快速的分子篩查和診斷。根據(jù)Holm等提出的臨床診斷標準

3、中的主要、次要標準，總結(jié)PWS確診病例的臨床表型特征并與國內(nèi)外相關(guān)文獻進行比較，進而歸納出我國PWS患兒的典型臨床特征。對經(jīng)MS-PCR分析確診的患者，采用MS-MLPA和短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)技術(shù)進行不同分子遺傳機制的鑒別。
　　結(jié)果:70例臨床疑診患兒中，男性42例，女性28例，年齡分布在1月～14歲。經(jīng)MS-PCR分析，31(44％)名患兒確診為PWS，其中男性18例，女性13例。對31例患兒進一步行MS-MLPA分析，明

4、確26例為父源缺失型(83.9％)，另5例為甲基化異常，后經(jīng)STR遺傳連鎖分析，明確均為母源同源二倍體型(mUPD，16.1％)，父源缺失型所占比例高于歐美高加索人群而與亞洲人群相似。共有25名患兒的臨床診斷評分滿足PWS的臨床診斷要求，另6名9月齡以下的嬰兒，分值均低于5分。所有患兒均存在母孕期胎動減少、新生兒期肌張力低下、喂養(yǎng)困難。過度攝食、肥胖、性腺發(fā)育不良的發(fā)生占77.42％(24/31)以上，特殊面容的發(fā)生占54.8％(17/

5、31)，35.5％(11/31)的患兒存在皮膚摳/抓后的活動性皮損，僅有12.9％(4/31)的患兒診斷為身材矮小。與mUPD型相比，缺失型患兒更易出現(xiàn)肥胖、過度攝食、構(gòu)音障礙和手/足小。與中外研究相比，中國PWS患兒發(fā)育遲緩、身材矮小、唾液粘稠和色素減低的發(fā)生率較低，特殊面容、皮損、行為問題、睡眠障礙、手足/小及眼睛問題所占比例與臺灣人群的研究結(jié)果無差異，但顯著低于歐美人群，而母孕期胎動減少、嬰兒期喂養(yǎng)困難及性腺發(fā)育不良的發(fā)生率則高于

6、歐美人群。
　　結(jié)論:PWS分子遺傳學(xué)診斷的具體策略，推薦以MS-PCR方法作為快速篩查手段，在此基礎(chǔ)上結(jié)合MS-MLPA和STR遺傳連鎖分析進行不同分子遺傳機制的鑒別。母孕期胎動減少、中樞性肌張力低下、喂養(yǎng)困難是中國PWS患兒臨床診斷的重要指征，性腺發(fā)育不良、過度攝食和肥胖也是重要的臨床線索，對于皮膚色素減低同時伴有肌張力低下及喂養(yǎng)困難者也應(yīng)提高警惕，而身材矮小的發(fā)生并不多見。
　　第二部分Prader-Willi綜合征患

7、兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性研究
　　目的:生長激素受體(GHR)基因外顯子3多態(tài)性，是目前臨床應(yīng)用生長激素(GH)治療疾病的研究熱點。本研究目的在于了解中國PWS患兒GHR基因外顯子3多態(tài)性，并與其他人群的多態(tài)性分布進行比較，為探討重組人生長激素(rhGH)在中國PWS患兒的臨床應(yīng)用前景及療效與遺傳多態(tài)性間的相關(guān)性提供線索。
　　方法:回顧性分析57例經(jīng)分子遺傳學(xué)確診的PWS患兒。采用多重聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的方法對GH

8、R基因外顯子3進行多態(tài)性分析。與中外正常人群、不同病因的矮小人群和肥胖人群進行比較，總結(jié)中國PWS患兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性特點。
　　結(jié)果:57例分子遺傳學(xué)確診的PWS患兒中，GHR外顯子3三種基因型fl/fl、fl/d3、d3/d3的分布頻率分別為70％、23％和7％，與中國不同地區(qū)正常兒童的分布頻率無差異，但d3/d3和fl/d3基因型的頻率低于正常歐洲兒童。與不同病因身材矮小兒童進行比較，本研究PWS患兒GHR外顯子3

9、基因型的分布頻率與特發(fā)性矮小(ISS)及Turner綜合征(TS)患兒的分布無差別，但不同于生長激素缺乏癥(GHD)的患兒。與我院以往的肥胖/超重兒童GHR基因外顯子3多態(tài)性的研究相比，中國PWS患兒GHR外顯子3基因型的分布特點與肥胖/超重兒童并無明顯差別。將文獻中報道的PWS患兒GHR外顯子3基因型與本研究中PWS患兒基因型的分布進行比較，發(fā)現(xiàn)不同人群PWS患兒GHR外顯子3基因型分布存在差異。
　　結(jié)論:中國PWS患兒GHR