外源性配體激動Toll樣受體致小鼠重癥急性胰腺炎的實驗研究.pdf

1、目的：重癥急性胰腺炎(SAP)是臨床上多見的危重疾病，一旦發(fā)生，無有效方法遏制其進展，死亡率在20％～30％左右，國外報道達40％。目前人們已發(fā)現(xiàn)了許多與胰腺炎病程有關的因素，其中炎性介質、細胞因子等誘發(fā)的巨噬細胞、中性粒細胞及血管內皮細胞過度活化所引起的全身炎性反應是一重要因素。SAP是一種全身性疾病，細胞因子和炎癥反應失衡理論在SAP發(fā)病機制中的重要地位現(xiàn)已得到公認。20世紀90年代提出了關于全身性炎癥反應綜合征(SIRS)發(fā)生機制

2、的“二次打擊”(two-hit)理論。對于SAP我們認為：各種刺激構成對機體第一次打擊形成急性水腫性胰腺炎(AEP)，而在一定時間內以適當?shù)牧砍霈F(xiàn)的各種類型的抗原沖擊免疫系統(tǒng)構成了二次打擊，引發(fā)了細胞因子的級聯(lián)反應形成SIRS，導致SAP的發(fā)生。Toll樣受體(TLR)是近年來在多種生物體內發(fā)現(xiàn)的一類介導固有免疫的細胞膜受體家族，它通過活化一系列與免疫相關的基因表達而發(fā)揮作用。有關TLR激活的信號傳導過程主要來自對TLR2和TLR4的研

3、究。外源性配體激活TLR后，通過一系列復雜的的信號轉導，導致核因子-kappaB(NF-kB)激活，啟動細胞因子釋放，最終形成SAP。本實驗通過建立SAP小鼠實驗模型，觀察小鼠AEP時不同時間LPS、BLP二次打擊小鼠SAP的發(fā)生、血清淀粉酶及細胞因子IL-1B的表達，來證實“急性水腫性胰腺炎+抗原二次打擊”產生SAP的理論。通過檢測胰腺組織TLR蛋白表達，來闡明TLR在SAP中的作用。 方法 選取BALB/C小鼠60只

4、，體重18-22g，隨機分成4組。1組為正常對照組，2組為雨蛙素AEP組，3組為脂多糖(LPS)組、4組為LPS+脂蛋白(BLP)組，每組按時間不同分為a、b、c三個小組。采用雨蛙素腹腔注射制成AEP。分別于AEP形成后5、24、72小時注射LPS、LPS+BLP，注射后6小時取血液及胰腺標本，檢測各組實驗動物的血清淀粉酶、IL-1B的表達。免疫組化SP法檢測小鼠胰腺TLR2、4蛋白表達。 結果 (1)血清淀粉酶、胰腺組

5、織學評分：1組與2組間、2組與3、4組間差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01．)，證明SAP模型建立成功。(2)血清IL-1B的表達：1組與2組間、2組與3、4組間差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)，3組與4組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)2～4組各組內比較，以AEP形成后24h時(b組)IL-1B表達最為明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(4)免疫組化SP法檢測小鼠胰腺TLR2、4蛋白表達(a組)，對TLR4表達做統(tǒng)