重癥肌無力的多基因多位點單核苷酸多態(tài)性分析.pdf

1、背景：重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）是T細胞依賴的慢性自身免疫性疾病，由神經(jīng)肌肉接頭處乙酰膽堿受體抗體介導(dǎo)，以骨骼肌、延髓肌和眼外肌波動性的疲乏無力為特點，其病因尚未完全明確。國內(nèi)外關(guān)于重癥肌無力的遺傳流行病學(xué)研究表明，其發(fā)病與遺傳、內(nèi)分泌、環(huán)境和免疫等因素有關(guān)，但是任何一種因素都不能完全解釋MG的發(fā)病機理。有學(xué)者認(rèn)為多因素、多基因積累共同導(dǎo)致了MG的發(fā)生，不同的個體可能存在不同的病因組合，其中遺傳基因的易感性占

2、了重要地位。大量研究表明，不同的自身免疫性疾病可能有共同的易感因素，一種自身免疫性疾病的易感基因可能會與其它自身免疫性疾病相關(guān)。單核苷酸多態(tài)性（SNP）是人類基因組中最常見的遺傳多態(tài)性，常用來研究與復(fù)雜性疾病的關(guān)聯(lián)性。而且，在不同的人種SNP與疾病易感性的相關(guān)性可有不同結(jié)果。本研究篩選了與日本其它自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等易感性緊密相關(guān)的9個異常SNP作為研究重點，試圖研究這些基因多態(tài)性與MG的相關(guān)性。
　　

3、 目的：分析分化群244（CD244）rs6682654、Fc受體樣因子3（FCRL3）rs7528684、可溶性載體家族22A4（SLC22A4）rs2073838、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)移因子（RUNX1）rs2268277、信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子4（STAT4）rs7574865、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1（TRAF1）rs3761847、補體成分5（C5）rs10818488、B淋巴細胞激酶（BLK）rs13277113、干擾素調(diào)節(jié)因

4、子5（IRF5）rs2004640的單核苷酸多態(tài)性，研究日本重癥肌無力與這些異常基因和位點的相關(guān)性，探討MG的遺傳背景及發(fā)病機制，以便早期基因診斷和早期篩選MG高危人群，為MG的治療提供依據(jù)。
　　 方法：采用病例-對照研究的方法，病例組納入日本東京女子醫(yī)科大學(xué)門診和病房的52例重癥肌無力患者，抽取外周血抗凝，提取白細胞DNA，利用ABI stepone實時定量PCR儀和taqman SNP genotyping試劑盒熒光探針技

5、術(shù)，檢測這些單核苷酸多態(tài)性位點，以既往對日本人進行研究的文獻中以上位點的正常對照為對照，進行Hardy-Weinberg平衡分析，計算OR和95％可信區(qū)間（CI），行卡方檢驗統(tǒng)計分析這些SNP與MG的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.IRF5 rs2004640的T等位基因和TT基因型與日本重癥肌無力易感性相關(guān)（T vsG：x2=12.552，P<0.001，OR=2.071，95％CI[1.375-3.118]；TT

6、vs TG+GG：x2=15.641，P<0.001，OR=3.719，95％CI[1.868-7.400]），提示該SNP是MG的風(fēng)險因素。
　　 2.FCRL3 rs7528684的C等位基因和CC基因型與MG易感性無相關(guān)（C vs T：x2=0.508，P=0.476，OR=0.861，95％CI[0.570-1.300]；CC VS CT+TT：x2=0.506，P=0.479，OR=1.306，95％CI[0.622-

7、2.743]），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 3.CD244 rs6682654的T等位基因和TT基因型與MG易感性無相關(guān)（T vs C：x2=0.225，P=0.635，OR=0.908，95％CI[0.608-1.356]；TT vs CT+CC：x2=0.402，P=0.526，OR=0.771，95％CI[0.344-1.728]），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 4.SLC22A4 rs207

8、3838的A等位基因和AA基因型與MG易感性無相關(guān)（A vs G：x2=0.177，P=0.674，OR=1.093，95％CI[0.723-1.652]；AA vs AG+GG：x2=2.027，P=0.155，OR=1.740，95％CI[0.804-3.7641），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 5.RUNX1 rs2268277的C等位基因和CC基因型與MG易感性無相關(guān)（C vs G：x2=0.088，P=0.7

9、67，OR=1.064，95％CI[0.706-1.605]；CC vs CG+GG：x2=1.769，P=0.183，OR=0.499，95％CI[0.176-1.417]），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 6.STAT4 rs7574865的T等位基因和TT基因型與MG易感性無相關(guān)（T vs G：x2=0.048，P=0.826，OR=1.048，95％CI[0.692-1.586]；TT vs TG+GG：x2=0

10、.366，P=0.545，OR=0.729，95％CI[0.260-2.040]），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 7.TRAF1 rs3761847的A等位基因和AA基因型與MG易感性無相關(guān)（Avs G：x2=0.158，P=0.691，OR=1.082，95％CI[0.734-1.595]；AA vs AG+GG：x2=0.054，P=0.816，OR=0.921，95％CI[0.459-1.846]），提示該SNP

11、不是MG的風(fēng)險因素。
　　 8.C5 rs10818488的G等位基因和GG基因型與MG易感性無明顯相關(guān)（G vs A：x2=0.592，P=0.442，OR=1.164，95％CI[0.790-1.716]；GG vs AG+AA：x2=0.071，P=0.790，OR=1.095，95％CI[0.560-2.145]），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 9.BLK rs13277113的G等位基因和GG基因型與

12、MG易感性無相關(guān)（G vs A：x2=0.649，P=0.421，OR=1.182，95％CI[0.786-1.777]；GG vs AG+AA：x2=0.345，P=0.557，OR=1.276，95％CI[0.564-2.886]），提示該SNP不是MG的風(fēng)險因素。
　　 結(jié)論：ABI stepone實時定量PCR儀和stepone software2.1具有自動單核苷酸多態(tài)性基因分型識別功能，具有直觀的圖表輸出和量值分配特

13、性，可準(zhǔn)確快捷獲得基因分型結(jié)果。本文首次分析了FCRL3 rs7528684、CD244 rs6682654、SLC22A4 rs2073838、RUNX1 rs2268277、STAT4 rs7574865、TRAF1 rs3761847、C5 rs10818488、BLK rs13277113和IRF5 rs2004640的單核苷酸多態(tài)性與日本重癥肌無力的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)IRF5 rs2004640與MG易感性相關(guān)，顯示了該SNP在自身