柑橘逆境中外源亞精胺的作用及多胺類(lèi)基因SAMDC的表達(dá)分析.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文柑橘逆境中外源亞精胺的作用及多胺類(lèi)基因SAMDC的表達(dá)分析姓名：林佳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：果樹(shù)學(xué)指導(dǎo)教師：胡春根20060601柑橘逆境中外源鼯精胺的作用及多胺類(lèi)基凼SAMDC的表達(dá)分析柑橘逆境中外源亞精胺的作用及多胺類(lèi)基因翩徹C的表達(dá)分析摘要柑橘是世界上重要的經(jīng)濟(jì)水果，深受人們喜愛(ài)。柑橘又是～種畏寒，喜溫、忌鹽堿的果樹(shù)。周期性?xún)龊?、突發(fā)性寒潮，及海涂鹽漬地、過(guò)渡耕作產(chǎn)生的次生鹽漬化，不同程度地影響著柑橘的產(chǎn)量

2、及品質(zhì)。研究柑橘在冷、鹽逆境下的生理變化及抗性調(diào)節(jié)具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。本文采用生長(zhǎng)均一性好、逆境條件易于控制的愈傷組織研究體系，對(duì)柑橘不同品種愈傷組織在逆境下的生理變化、外源多胺對(duì)逆境下的抗性調(diào)節(jié)以及多胺合成酶類(lèi)的基因SAMLlC的分離和表達(dá)作了初步的研究。主要研究結(jié)果如下；1對(duì)柑橘愈傷組織進(jìn)行鹽(Nacl)脅迫(0rmol／L一200retool／L)35d后測(cè)定其增重情況發(fā)現(xiàn)：低鹽濃度，尤其是25mmol／L對(duì)愈傷的生長(zhǎng)有促進(jìn)

3、作用。而150mmol／L以上，愈傷的生長(zhǎng)受到抑制，200mol／L以上愈傷大量死亡。不同品種間的表現(xiàn)不同，構(gòu)頭橙在150mmol／L以下的鹽脅迫中表現(xiàn)了較強(qiáng)的抗鹽性，寧波金柑次之，紐荷爾最差。2對(duì)柑橘愈傷進(jìn)行低溫脅迫(4℃，Oh一9d)處理后培養(yǎng)35d測(cè)定其增重情況發(fā)現(xiàn)：低溫脅迫12h和24h對(duì)愈傷的生長(zhǎng)有明顯促進(jìn)作用，而低溫脅迫5d以上，生長(zhǎng)緩慢，低溫脅迫9d以上的生長(zhǎng)基本停止不同品種間也表現(xiàn)了差異，其中構(gòu)頭橙對(duì)低溫表現(xiàn)更敏感，脅迫

4、5d后愈傷的增殖明顯減緩。3在鹽脅迫對(duì)柑橘愈傷組織的電導(dǎo)率及丙二醛含量的研究中發(fā)現(xiàn)：隨著脅迫時(shí)間的增長(zhǎng)，相對(duì)電導(dǎo)率的值表現(xiàn)為持續(xù)上升，24h以下的上升幅度較大；同樣的，丙二醛的含量也是隨脅迫時(shí)間的加長(zhǎng)而逐漸上升；相反，在4℃低溫脅迫中發(fā)現(xiàn)，相對(duì)電導(dǎo)率變化不大，而丙二醛的含量有所增加。表明高鹽脅迫中的細(xì)胞膜受到較大程度損傷。4外加05咖ol／LSpd對(duì)愈傷的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。05n朋ol／L的Spd對(duì)鹽脅迫和低溫脅迫下的愈傷的生長(zhǎng)同樣有促進(jìn)

5、作用。在短時(shí)間鹽脅迫和低溫脅迫下，Spd極大地促進(jìn)了愈傷的增殖。而在較長(zhǎng)時(shí)間的脅迫后，Spd的作用不明顯。在進(jìn)一步的相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫下愈傷的電導(dǎo)率在加入Spd后下降，而低溫脅迫下的加入Spd前后的愈傷變化不大。5通過(guò)分離SA^／DC基因片段來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)多胺類(lèi)基因的表達(dá)研究。分離獲得尉腳F基因片段(743bp)，經(jīng)過(guò)半定量RTPCR研究發(fā)現(xiàn)：在低溫脅迫中，脅迫后的愈傷組織中SAMDC的表達(dá)量均有上升，尤以脅迫ld的上升較為明顯，