人參皂苷對(duì)復(fù)蘇大鼠線粒體功能的作用及實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷倪x擇.pdf

1、目的：比較3種常用心臟停搏實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?-電刺激法、氯化鉀注射法和窒息法的模擬效果及對(duì)機(jī)體生化環(huán)境與能量代謝的影響；探討人參皂苷對(duì)心臟停搏大鼠自主循環(huán)恢復(fù)率、復(fù)蘇后存活情況、能量代謝及線粒體功能等方面的作用。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)共分兩個(gè)部分。第一部分為模型比較，成年wistar大鼠共102只，隨機(jī)分為3組：電刺激組（n=36）、氯化鉀組（n=44）和窒息組（n=22），分別采用經(jīng)食道心臟調(diào)搏、經(jīng)頸靜脈注射氯化鉀溶液以及阻斷通氣3種不同

2、方法誘發(fā)心臟停搏（CA）；以上每組根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)各分為復(fù)蘇前和復(fù)蘇后2個(gè)亞組（總計(jì)6個(gè)實(shí)驗(yàn)組），復(fù)蘇前組處置的時(shí)間點(diǎn)為CA后5min、心肺復(fù)蘇（CPR）實(shí)施前，復(fù)蘇后組處置的時(shí)間點(diǎn)為恢復(fù)自主循環(huán)（ROSC）后即刻。每組動(dòng)物從誘發(fā)CA出現(xiàn)到開(kāi)始CPR的間期（非干預(yù)間期）統(tǒng)一為5min；CPR措施包括胸外按壓、人工通氣以及靜脈注射腎上腺素（100μg/kg）等。觀察各組動(dòng)物模型的CA發(fā)生率、CA的心電圖類(lèi)型、ROSC比率及其前后的生命體征變

3、化（體溫、心率、血壓等）；檢測(cè)各組復(fù)蘇前后血?dú)?、電解質(zhì)、血糖及乳酸等指標(biāo)的變化；此外，使用高效液相色譜法檢測(cè)組織磷酸腺苷（AMP、ADP及ATP）的含量并計(jì)算能荷（Ec）。第二部分為人參皂苷的作用研究。成年Wistar大鼠870只，隨機(jī)分為5組：①腎上腺素組（n=450）、②腎上腺素加山茛菪堿組（n=110，簡(jiǎn)稱(chēng)山莨菪堿組）、③腎上腺素加人參皂苷組（n=160，簡(jiǎn)稱(chēng)人參皂苷組）、④腎上腺素加人參皂苷加山莨菪堿組（n=110，簡(jiǎn)稱(chēng)聯(lián)合用藥

4、組）和⑤假手術(shù)組（n=40），該組不誘發(fā)CA，不進(jìn)行CPR等處理。前4組使用電刺激法誘發(fā)CA，非干預(yù)間期5min后行CPR（參見(jiàn)第一部分）。以上5組根據(jù)ROSC后觀察處置的不同時(shí)間又分為ROSC即刻、3h、6h、12h和24h共5個(gè)亞組。觀察記錄各組的ROSC率、存活時(shí)間、生命體征變化；檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)的ATP值并計(jì)算能荷；使用激光共聚焦顯微鏡及熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)的膜電位和活性氧簇（ROS）水平；電鏡下觀察線粒體形態(tài)學(xué)變化并

5、進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。
　　 結(jié)果：第一部分：窒息組的CA發(fā)生率、ROSC率、復(fù)蘇前乳酸水平和PCO2均顯著高于其他2組（p<0.05），而復(fù)蘇前、后的能荷水平均顯著低于其他2組（p<0.05）；氯化鉀組復(fù)蘇前、后的能荷水平及鉀離子濃度均顯著高于其余2組（p<0.05），而CA發(fā)生率顯著低于其余2組（p<0.05）；電刺激組和氯化鉀組誘發(fā)CA的心電圖類(lèi)型表現(xiàn)多樣，以室顫和室速為主，而窒息組CA的形式主要為無(wú)脈電活動(dòng)或心電靜止。第二部分：

6、人參皂苷組對(duì)ROSC率的影響較腎上腺素組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p=0.086）；人參皂苷組、山莨菪堿組和聯(lián)合用藥組均可提高大鼠的存活率（p<0.05），但3者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）；在對(duì)能荷、膜電位及活性氧的影響方面，人參皂苷、山莨菪堿以及二者之間的交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），人參皂苷在ROSC后3h能荷顯著高于山莨菪堿組（p<0.05），而在ROSC后即刻～6h之間的膜電位水平則低于山茛菪堿組，與腎上腺素組比較無(wú)顯著提高

7、（p>0.05）。聯(lián)合用藥組的活性氧水平低于單獨(dú)用藥組。電鏡下形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果：人參皂苷在ROSC后3h線粒體形態(tài)即基本恢復(fù)正常，并出現(xiàn)功能代償性增強(qiáng)表現(xiàn)；計(jì)數(shù)結(jié)果人參皂苷組在ROSC后3h線粒體壞死的發(fā)生率顯著低于腎上腺素組（p<0.05）。
　　 結(jié)論：1.電刺激法模型對(duì)大鼠機(jī)體生化環(huán)境影響小，CA的心電類(lèi)型與臨床相符，誘發(fā)CA的發(fā)生率及對(duì)機(jī)體能量代謝的影響程度介于另2種模型之間，相對(duì)較穩(wěn)定，因此綜合效果最佳；2.人參皂苷可顯