骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與珊瑚羥基磷灰石復(fù)合自體肌肉內(nèi)移植成骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 探討兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和鑒定的方法體系；實(shí)驗(yàn)觀察珊瑚羥基磷灰石(CHA)復(fù)合兔MSCs的生物相容性及誘導(dǎo)成骨能力，并評(píng)價(jià)其構(gòu)建組織工程骨的可行性及臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法: 1.兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和鑒定。 穿刺抽取兔髂骨骨髓，用密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法相結(jié)合，分離兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增，繪制其生長(zhǎng)曲線，計(jì)算倍增時(shí)間，測(cè)定細(xì)

2、胞貼壁率，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的生物學(xué)性狀。通過(guò)免疫熒光組織化學(xué)鑒定細(xì)胞，了解其部分表型特點(diǎn)。行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，假定P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.兔 MSCs復(fù)合CHA自體肌肉內(nèi)異位成骨能力的實(shí)驗(yàn)研究。 取生長(zhǎng)良好的第三代細(xì)胞，將其誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化成為成骨細(xì)胞，接種于盤(pán)狀CHA上，自體移植于兔背部肌肉內(nèi)，同時(shí)植入單純的CHA作為對(duì)照。植入4、8周后取材，形態(tài)學(xué)觀察(光學(xué)顯微鏡)其新骨形成情況。 結(jié)果: 1.分離培養(yǎng)

3、的細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈梭形，細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，原代細(xì)胞呈集落生長(zhǎng)，12-15天達(dá)到融合，傳代后增殖速度加快，平均倍增時(shí)間為34h，隨傳代次數(shù)的增加細(xì)胞的增殖能力有所下降，1、3、5代細(xì)胞接種12h后貼壁率在90％以上。骨髓MSCs均一表達(dá)CD44，而不表達(dá)CD34。 2.植入兔體內(nèi)的成骨細(xì)胞/CHA復(fù)合物，在不同的時(shí)間段，都觀察有新骨形成。陰性對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)骨組織形成。 結(jié)論: 1.密度梯度離心與貼壁培養(yǎng)相結(jié)合，可有效分