大鼠胚肝細(xì)胞肝內(nèi)移植和慢病毒載體Lenti-lacZ的表達(dá).pdf

1、為了研究大鼠胚肝細(xì)胞作為肝病基因治療受體細(xì)胞的可行性,明確目的基因在體外培養(yǎng)的胚肝細(xì)胞中能否表達(dá),攜帶目的基因的胚肝細(xì)胞移植到肝內(nèi)能否大量增殖,目的基因能否持續(xù)大量表達(dá),以及方法的建立,我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn):第一部分,原代培養(yǎng)胎齡14天SD大鼠胚肝細(xì)胞,構(gòu)建慢病毒載體Lenti-lacZ并體外轉(zhuǎn)導(dǎo)大鼠胚胎肝細(xì)胞,檢測(cè)LacZ基因的表達(dá);第二部分:雌性SD大鼠予倒千里光堿預(yù)處理后,慢病毒載體Lenti-lacZ轉(zhuǎn)導(dǎo)的大鼠胚胎肝細(xì)胞通過門靜脈注

2、射移植到大鼠肝臟,檢測(cè)細(xì)胞移植后8周內(nèi)大鼠肝臟LacZ基因的表達(dá),以及PCR檢測(cè)肝組織Sry基因(Y染色體標(biāo)記基因)明確移植的胚肝細(xì)胞在體內(nèi)是否增殖.本實(shí)驗(yàn)得出如下結(jié)論:1.建立了胎齡14天SD大鼠胚肝細(xì)胞分離、體外培養(yǎng)和鑒定方法.2.慢病毒載體Lenti-lacZ能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)體外培養(yǎng)的胚肝細(xì)胞,在胚肝細(xì)胞體外培養(yǎng)1天和MOl為10時(shí)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率為26.3％.3.建立了胚肝細(xì)胞肝內(nèi)移植的倒千里光堿/肝葉切除動(dòng)物模型.4.載體Lenti-lacZ