α1-微球蛋白試劑盒的研發(fā)及臨床應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　以膠乳增強免疫比濁法作為基本原理，研發(fā)出一種具有自我知識產(chǎn)權(quán)的α1-微球蛋白(α1-MG)檢測試劑，為臨床提供一種診斷性能好、具有價格優(yōu)勢的試劑，并評價其在糖尿病腎病早期腎臟損傷方面的應(yīng)用價值。
　　方法:
　　1.利用膠乳增強免疫比濁法制備α1-MG免疫微球，研究并確定α1-MG檢測試劑所用的EDAC用量、膠乳直徑、α1-MG抗體用量、反應(yīng)時間等最佳條件，建立自制試劑在日立7170分析系統(tǒng)下的最佳反應(yīng)體系

2、，對成品試劑的精密度、線性范圍、穩(wěn)定性、回收性能、抗干擾等進行評價，并對自研試劑與美康試劑進行相關(guān)性分析。
　　2.收集健康對照組(n=150)晨尿標(biāo)本以確定尿液α1-MG的正常參考值范圍。另選擇糖尿病患者(n=81)以尿mAlb為分組依據(jù)分為正常蛋白尿組、微量蛋白尿組和大量蛋白尿組，收集患者靜脈血和24h尿液分別測定血清α1-MG、肌酐以及24h尿mAlb、尿液α1-MG、尿液β2-MG、尿NAG酶含量，采用自研試劑測定受試者尿

3、液及血清α1-MG含量。比較各實驗組血清α1-MG、血清肌酐、24h尿mAlb、尿液α1-MG、尿液β2-MG、尿NAG酶水平的差異并進行相關(guān)性分析，利用ROC曲線評價比較各指標(biāo)診斷糖尿病腎病的效能，以探討糖尿病患者尿液α1-MG和血清α1-MG檢測對糖尿病腎病的預(yù)測和診斷價值。
　　結(jié)果:
　　1.膠乳直徑為80nm，EDAC的最佳用量為8.0mg/L～9.0mg/L，抗體與包被緩沖液體積比為0.08∶1(每毫升包被緩沖液

4、中抗體加入量為80μl)，最佳反應(yīng)時間為3h。低、中、高三個不同濃度的批內(nèi)CV分別為5.09％、2.68％和2.86％，批間CV分別為7.66％、3.30％和3.17％;線性范圍為0～92.0mg/L;3個月內(nèi)試劑具有良好穩(wěn)定性;回收率為96.28％～103.45％，平均回收率為98.92％;血清中血紅蛋白≤10g/L、膽紅素濃度≤310ummol/L和甘油三酯≤6.5mmol/L時，對α1-MG的測定沒有顯著性干擾，但當(dāng)甘油三酯濃度達

5、到14.75mmol/L時對低濃度的α1-MG測定干擾較大，因此嚴重脂血標(biāo)本測得的α1-MG值較低時應(yīng)考慮高甘油三酯的干擾。對自研試劑和美康試劑分別測得的血清α1-MG的結(jié)果進行直線回歸分析，得回歸方程為Y=0.9787X-0.314，r=0.991，可以認為兩種試劑具有極佳的正相關(guān)(P＜0.01);其中b=0.9787接近1，r＞0.95，自研試劑可替代商品試劑應(yīng)用于臨床。
　　2.測定150例正常對照者尿液α1-MG，確定正常

6、成年人α1-MG參考值范圍是0～12.8mg/L。采用24h尿mAlb作為分組依據(jù)，按尿mAlb結(jié)果將81例糖尿病患者分為正常蛋白尿組(n=39，尿mAlb＜30mg/24h);微量蛋白尿組(n=20，尿mAlb:30mg/24h-300mg/24h);大量蛋白尿組(n=22，尿mAlb＞300mg/24h)。隨著尿mAlb排泄率的增加，血清肌酐、血清α1-MG、尿液α1-MG、尿液β2-MG及尿液NAG酶濃度均逐漸增高，大量蛋白尿組＞

7、微量蛋白尿組＞正常蛋白尿組。尿液α1-MG、血清α1-MG與mAlb、β2-MG均呈正相關(guān)，但血清α1-MG與NAG酶無相關(guān)性。尿液α1-MG與血清α1-MG呈正相關(guān)，r=0.479。進一步分組分析發(fā)現(xiàn)，正常蛋白尿組中尿液α1-MG與β2-MG呈正相關(guān)，但與mAlb無相關(guān)性，血清α1-MG與其他指標(biāo)相關(guān)性不大;大量蛋白尿組中尿液α1-MG與mAlb、β2-MG呈正相關(guān);血清α1-MG與尿液α1-MG、mAlb呈正相關(guān)。ROC曲線結(jié)果顯示

8、尿液α1-MG的AUC為0.894，尿mAlb、血清α1-MG、尿液β2-MG、尿NAG酶的AUC分別為0.816、0.806、0.770和0.680(P＜0.05)，表示在對糖尿病腎臟損害的診斷上尿液α1-MG和血清α1-MG均具有較高價值。
　　結(jié)論:
　　1.成功制備了以膠乳增強免疫比濁法為原理的α1-MG檢測試劑，制備的成品試劑具有較高的臨床應(yīng)用價值，為臨床實驗室提供了新的選擇。
　　2.尿液α1-MG和血清α