組織工程骺板的構建及其治療骺板損傷的實驗研究.pdf

1、一、骺板組織工程種子細胞——兔骺板軟骨細胞體外培養(yǎng)及其細胞表型的研究 目的:探索體外培養(yǎng)兔骺板軟骨細胞的方法，并對其細胞表型進行初步研究，為骺板組織工程尋找良好的種子細胞。 方法:取兩周齡，體重250g左右幼兔脛骨上端骺板，經過機械剪切、胰酶、膠原酶的消化獲得細胞后，1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。 應用倒置顯微鏡、透射電鏡、Alcian blue染色、蕃紅花“O”——亮綠染色，免疫組織化學染色、PCR、MTT等方法，對

2、細胞進行定性、定量檢測。 結果:在體外觀察到了骺板軟骨細胞貼壁生長及傳代的生長過程，多次傳代后增殖能力降低。PCR檢測有Ⅱ型膠原的表達、蕃紅花“O”——亮綠染色陽性、Alcian blue染色顯示第三代細胞蛋白聚糖含量高，MTT顯示第三代細胞生長曲線呈倒“S”型，于第12天出現生長抑制。 結論:成功地建立了骺板軟骨細胞的體外培養(yǎng)方法，并證實所培養(yǎng)出的細胞是骺板軟骨細胞。 二、組織工程骺板的構建——兔骺板軟骨細胞分

3、別與多孔聚乳酸、多孔絲素構建兩種組織工程骺板并比較其體外相容性 目的:探索兔骺板軟骨細胞與生物支架材料復合構建組織工程骺板的可行性。 方法:將體外培養(yǎng)的第三代兔骺板軟骨細胞分別與多孔聚乳酸材料、多孔絲素材料復合，構建兩種組織工程骺板。應用掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡、MTT等方法，對細胞與材料的相容性進行觀察，并對兩種生物支架材料進行比較。 結果:兔骺板軟骨細胞在支架材料上生長良好，隨著培養(yǎng)時間的延長，分裂增殖的細

4、胞逐漸增多。細胞在兩種材料上生長情況類似，統計學顯示無顯著性差異。 結論:多孔聚乳酸材料和多孔絲素材料均具有良好的生物相容性，可以作為骺板組織工程理想的載體材料。 三、組織工程骺板治療骺板損傷的動物實驗研究——兩種組織工程骺板分別治療骺板損傷并對其進行比較 目的:探索組織工程骺板在治療骺板損傷中的作用。 方法;將兩種組織工程骺板分別植入骺板損傷的模型中，同時設單純植入材料組、空白對照組。應用組織學、Brd

5、U細胞示蹤、X線等方法，觀察成角畸形和短縮畸形情況。同時對兩種組織工程骺板、以及兩種支架材料進行比較。 結果;空白組，骨橋明顯，短縮畸形和成角畸形顯著；單純植入支架材料組，短縮畸形和成角畸形明顯；組織工程骺板組，存在較小的短縮畸形和成角畸形。統計學顯示三種方法存在顯著性差異，兩種組織工程骺板之間，兩種支架材料之間無顯著性差異。 結論:組織工程骺板治療骺板損傷是一種有效的方法，其療效優(yōu)于單純植入生物支架材料。 四、

6、人骨骺軟骨細胞體外培養(yǎng)及鑒定的初步研究 目的:建立體外培養(yǎng)及鑒定人骨骺軟骨細胞的方法。 方法;取人多指切除手術之多指骨骺，先行機械剪切，后用胰蛋白酶及Ⅱ型膠原酶消化，再接種于1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)。應用蕃紅花“O”——亮綠染色，Alcian blue染色，免疫組化Ⅱ型膠原染色和MTT檢測，對其生物學特性進行了觀察和鑒定。 結果;在體外觀察到了人骨骺軟骨細胞貼壁生長及傳代的生長過程，多次傳代后增殖能力降低。蕃紅花