神犀丹對(duì)內(nèi)毒素休克大鼠損傷臟器的保護(hù)作用及炎癥細(xì)胞因子影響的研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著中醫(yī)對(duì)臨床急危重癥工作的開(kāi)展，中醫(yī)對(duì)感染性休克病因病機(jī)及治則認(rèn)識(shí)的不斷加深，提出外來(lái)溫?zé)岫拘?，引起正氣不足，氣耗陰脫、脈絡(luò)瘀阻，陰陽(yáng)之氣不相順接，陽(yáng)氣郁閉于內(nèi)，四肢得不到溫養(yǎng)，以致逆冷成厥，氣機(jī)逆亂，神明失主是其主要病機(jī)，采用涼血化瘀解毒，養(yǎng)陰生津，芳香化濁開(kāi)竅法治療，取得一定的療效。本課題在既往臨床有效的前提下，研究神犀丹對(duì)感染性休克大鼠損傷臟器的保護(hù)作用，并從相關(guān)炎癥細(xì)胞因子角度研究其作用機(jī)制，以期為該方所體現(xiàn)的治法治療

2、感染性休克的作用機(jī)制研究開(kāi)辟思路，為臨床運(yùn)用提供理論根據(jù)。
　　目的：觀察涼血散血開(kāi)竅法代表方神犀丹對(duì)內(nèi)毒素休克大鼠損傷臟器的保護(hù)作用及相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的影響。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一采用60只SPF級(jí),SD大鼠,雄性,隨機(jī)分為正常組、模型組、神犀丹組。除正常組外，其余各組均給予腹腔注射D_氨基半乳糖（GalN）和尾靜脈注射脂多糖（LPS）復(fù)制內(nèi)毒素休克大鼠模型，采用BL-42OE+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)全程監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓（

3、MAP）的變化，于0、2、6h采集血清標(biāo)本，檢測(cè)全血細(xì)胞、血清總膽紅素（TB）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的含量；于0、2、6h每組處死大鼠4只，蘇木精-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察大鼠肺肝組織的病理變化。
　　實(shí)驗(yàn)二采用24只SPF級(jí),SD大鼠,雄性,隨機(jī)分為正常組、模型組、神犀丹組。除正常組外，其余各組均給予腹腔注射D_氨基半乳糖（GalN）和尾靜脈注射脂多糖（LPS）復(fù)制內(nèi)毒素休克大鼠模

4、型，于0、2、6h采用酶聯(lián)免疫吸附法，檢測(cè)TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子表達(dá)水平。
　　采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件spss19.0進(jìn)行單因素方差分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較用F檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01表示差異有統(tǒng)計(jì)非常顯著意義。
　　結(jié)果：
　　1.平均動(dòng)脈壓的變化情況：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中正常組大鼠血壓大致保持正常，有輕微下降考慮是與每次抽血和實(shí)驗(yàn)創(chuàng)傷

5、有關(guān)；模型組大鼠在注射內(nèi)毒素后，血壓大多數(shù)在0.5h開(kāi)始下降，之后持續(xù)緩慢波動(dòng)性下降；神犀丹組大鼠血壓的變化趨勢(shì)與模型組基本相同，但血壓開(kāi)始下降的時(shí)間遲于模型組，至6h時(shí)下降明顯，6h時(shí)間點(diǎn)血壓降低程度與模型組相比明顯減輕。
　　2.全血細(xì)胞含量變化:注射 LPS后2h、6h，模型組白細(xì)胞(WBC)明顯低于正常組;神犀丹組在注LPS后2h和6hWBC也明顯降低，與正常組比較有顯著性差異意義,與模型組相比無(wú)顯著性差異。血小板計(jì)數(shù)(p

6、lt)在2小時(shí)，模型組與神犀丹組均無(wú)明顯下降；而至6h時(shí)，模型組 plt明顯低于正常組,但是神犀丹組卻無(wú)明顯降低，明顯高于模型組,說(shuō)明神犀丹能降低血小板的聚集。
　　3.大鼠血生化TB、LDH、AST、ALT含量變化：與正常組比較，模型組大鼠血清中TB、LDH、AST、ALT的含量均顯著升高；神犀丹組與模型組比較，血清TB、LDH、AST、ALT的含量上升幅度與模型組比較有顯著差異。
　　4.肺組織病理學(xué)改變：
　　肉

7、眼觀察:正常組,肺膨脹良好,表面無(wú)出血;模型組,肺體積增大,呈暗紅色,表面可見(jiàn)不同程度充血水腫,或見(jiàn)點(diǎn)灶狀出血;神犀丹組肺臟呈淺紅色,表面不同程度充血水腫。
　　光鏡下肺組織形態(tài)：不同時(shí)間點(diǎn)（0、2、6h）正常組肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，肺泡完整，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)病變；模型組2小時(shí)大鼠肺毛細(xì)血管明顯擴(kuò)張出血，血管腔內(nèi)有微血栓形成，肺泡間隔增寬增厚，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；6小時(shí)大鼠肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡腔內(nèi)纖維蛋白滲出，部分肺泡萎縮，可見(jiàn)大量炎

8、癥細(xì)胞浸潤(rùn)。神犀丹組2小時(shí)大鼠肺血管腔內(nèi)可見(jiàn)少量紅細(xì)胞，肺間質(zhì)結(jié)構(gòu)基本正常，肺泡壁少量炎性滲出物，可見(jiàn)輕到中度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；6小時(shí)大鼠可見(jiàn)肺內(nèi)充血，肺泡腔及肺間質(zhì)可見(jiàn)中量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　5.肝組織病理學(xué)改變：
　　光鏡下肝組織形態(tài)：不同時(shí)間點(diǎn)（0、2、6h）正常組肝組織：肝竇形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組2小時(shí)大鼠肝細(xì)胞大量彌漫性壞死，肝竇結(jié)構(gòu)紊亂，匯管區(qū)可見(jiàn)輕到中度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；6小時(shí)大鼠肝細(xì)胞大量片狀彌漫性壞

9、死，肝竇結(jié)構(gòu)破壞，匯管區(qū)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。神犀丹組2小時(shí)大鼠肝細(xì)胞少量彌漫性壞死，肝竇結(jié)構(gòu)紊亂，匯管區(qū)可見(jiàn)輕到中度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；6小時(shí)大鼠肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　6.大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10表達(dá)水平：與正常組比較，不同時(shí)間點(diǎn)(2、6h)模型組及神犀丹組大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的表達(dá)水平均顯著升高；神犀丹組與模型組比較，經(jīng)藥物干預(yù)

10、后的神犀丹組血清TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的表達(dá)水平上升幅度與模型組比較有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1.神犀丹能有效緩解內(nèi)毒素休克大鼠血壓下降程度，進(jìn)而對(duì)損傷臟器起保護(hù)作用。
　　2.神犀丹有改善內(nèi)毒素休克大鼠感染情況、改善肝功能，降低血小板聚集，改善微循環(huán)的作用。
　　3.神犀丹能夠明顯減輕內(nèi)毒素休克大鼠肺肝組織的炎癥反應(yīng)。
　　4.涼血散血開(kāi)竅法典型方神犀丹能夠顯著降低大鼠