5-Aza-CdR對EC9706細胞生物學行為及TFPI-2表達的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 食管癌是一種常見的惡性腫瘤,其發(fā)生率和死亡率在我國居第4位。由于早期診斷不易,就診時70％～80％的患者已經(jīng)進入臨床中晚期。手術治療曾經(jīng)被視作食管癌的標準治療方法,但即使是比較早期的病變,其術后復發(fā)率仍較高。目前,食管癌總的5年生存率約30％左右,療效亟待提高。近年來,隨著臨床腫瘤學的快速發(fā)展,食管癌的綜合治療日漸突出,并已引起業(yè)內(nèi)重視,成為臨床研究一大熱點。食管癌的內(nèi)科治療目前仍停留在細胞毒藥物治療水平上。

2、因此尋找新的分子作用靶點,發(fā)現(xiàn)新的靶向治療藥物具有重要的意義。
　　 組織因子途徑抑制物2(tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2)又稱胎盤蛋白-5(placental protein,PP),與TFPI是同系物,是Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制物家族的一個成員,它對包括基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、胰蛋白酶、纖溶酶在內(nèi)的多種酶類均有抑制作用

3、[1],而MMPs參與了細胞外基質(zhì)的重塑,同時它在纖維蛋白溶解、動脈粥樣硬化、傷口愈合及腫瘤細胞的浸潤轉(zhuǎn)移和血管新生等生理病理過程中都發(fā)揮著重要的作用。最近,TFPI-2基因被認為是一個新的候選抑癌基因,越來越多的研究表明TFPI-2能明顯抑制腫瘤中MMPs的活性與功能,通過維持細胞外基質(zhì)的完整、調(diào)控腫瘤細胞的凋亡及調(diào)節(jié)腫瘤血管生成等機制來控制惡性腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。啟動子區(qū)CpG島(CpGisland)高甲基化在腫瘤形成機制中的確切

4、作用我們尚不清楚,然而眾多證據(jù)表明,腫瘤抑癌基因CpG島異常的甲基化導致基因失活和轉(zhuǎn)錄抑制是腫瘤發(fā)生的重要機制之一[2-4]。CpG島的過甲基化是可逆的,通過人為或其他因素干預后,可使相關基因CpG島去甲基化而恢復其表達,因此去甲基化治療可能成為TFPI-2表達陰性的食管癌治療的一條新思路。
　　 目前關于TFPI-2基因在食管癌中的表達情況的分析研究尚少,本實驗的目的是探討5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-2-deoxycy

5、tidine,5-Aza-CdR)干預對食管鱗癌細胞株EC9706生長增殖及TFPI-2基因表達的影響,以探索TFPI-2基因的失活機制,同時尋找食管癌治療的新靶點。
　　 方法:
　　 選取食管鱗癌細胞株EC9706,并用不同濃度的5-Aza-CdR處理該細胞株。MTT法檢測干預前后細胞增長率的變化,FCM法檢測干預前后細胞凋亡率的變化,RT—PCR技術檢測干預前后EC9706細胞TFPI-2基因mRNA的表達,免疫組

6、化檢測干預前后EC9706細胞TFPI-2蛋白的表達。
　　 結果:
　　 食管鱗癌細胞株EC9706存在TFPI-2基因超甲基化,經(jīng)5-Aza-CdR處理后,細胞增殖受到抑制,細胞凋亡率明顯提高(P<0.05)；細胞中TFPI-2蛋白表達明顯增強,同時mRNA的表達水平也較處理前明顯提高(P<0.05)。
　　 結論:
　　 1、TFPI-2抑癌基因的表達沉默與食管癌的發(fā)生相關；
　　 2、5-