再生絲素膜對(duì)VEGF基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過觀察ECV304細(xì)胞和轉(zhuǎn)hVEGF165基因L929細(xì)胞在再生絲素膜上的生物學(xué)行為，研究再生絲素膜對(duì)VEGF基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響。 方法：首先對(duì)物理交聯(lián)再生絲素膜進(jìn)行了毒性試驗(yàn)和粘附試驗(yàn)，并研究了其對(duì)附著L929細(xì)胞細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。通過ECV304細(xì)胞在再生絲素膜表面的培養(yǎng)，觀察了細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)，測(cè)繪了生長(zhǎng)繁殖曲線，并通過ELISA方法測(cè)定了其VEGF的分泌水平。接下來用RT-PCR技術(shù)從ECV304細(xì)胞中克隆

2、出hVEGF165基因，構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.0-VEGF，鑒定正確后用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入L929細(xì)胞，G418篩選獲得能穩(wěn)定表達(dá)VEGF的L929轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。然后將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞在再生絲素膜表面培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)，用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法測(cè)定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞VEGF的轉(zhuǎn)錄水平，ELISA方法測(cè)定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞VEGF的表達(dá)水平。 結(jié)果：再生絲素膜無細(xì)胞毒性，成纖維細(xì)胞在其表面粘附性能正常，對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡未產(chǎn)生不良影響

3、，也不影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和其VEGF的分泌。成功克隆了hVEGF165基因，構(gòu)建了重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.0-VEGF，獲得了穩(wěn)定表達(dá)VEGF的L929轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。轉(zhuǎn)基因細(xì)胞在再生絲素膜上的生長(zhǎng)也不受影響，實(shí)時(shí)定量RT-PCR和ELISA檢測(cè)顯示再生絲素膜不影響該轉(zhuǎn)基因細(xì)胞VEGF基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。 結(jié)論：再生絲素膜不影響ECV304細(xì)胞和L929細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，再生絲素膜也不影響轉(zhuǎn)hVEGF165基因L929細(xì)胞