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文檔簡介
1、目的:本實(shí)驗(yàn)研究通過建立大鼠慢性胰腺炎模型,探討使用抗氧化劑普羅布考對大鼠慢性胰腺炎的治療作用及其作用機(jī)制。 方法: 第一部分 采用腹腔內(nèi)注射10%的二乙基二硫代氨基甲酸鹽(diethyldithiocarbam-ate,DDC)500mg/kg制造大鼠慢性胰腺炎模型。將48只雄性SD大鼠稱重、編號,應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表將其隨機(jī)分為模型組和對照組2組,每組24只大鼠。對模型組大鼠,每周2次腹腔內(nèi)注射10%的DDC500
2、mg/kg,對照組大鼠則每周2次腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.5ml/kg。從術(shù)后24小時開始,分別于手術(shù)后24小時、48小時、1周、2周、3周、4周稱量體重后處死模型組和對照組的各4只大鼠,測定血清及胰腺組織中的超氧歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量; HE染色病理切片觀察胰腺纖維化的程度;免疫組織化學(xué)檢測胰腺組織中α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle
3、 actin,α-SMA)、膠原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ,CO-Ⅰ)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factorbeta-1,TGF-β1)表達(dá)情況。 第二部分 模型制造成功后取50只雄性SD大鼠,體重220~240g,隨機(jī)分為5組,每組10只:對照組(A組)、模型組(B組)、普羅布考治療組(C、D、E組)。普羅布考治療分為3個劑量組:分別為 75mg/ kg(普低組,C組)、150mg/
4、kg(普中組,D組)、300mg/ kg(普高組,E組)連續(xù)喂養(yǎng)4周;而對照組和模型組則予以同體積的0.9%生理鹽水喂養(yǎng)。喂養(yǎng)4周后稱量體重后處死大鼠取標(biāo)本測定血清及胰腺組織中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;HE染色病理切片觀察胰腺纖維化的程度;免疫組織化學(xué)檢測胰腺組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)表達(dá)情況。 結(jié)果(一): 1. 體重的觀察:實(shí)驗(yàn)的前1周,對照組和模型組大鼠體重都有增長,對照組增長稍
5、快,模型組增長緩慢,但是兩組間無顯著性差異(P>0.05);1周后,對照組大鼠體重繼續(xù)增長,但是,模型組大鼠體重不增反降,兩組間體重有顯著性差異(P<0.01)。 2. Α-SMA、CO-Ⅰ、TGFβ1的表達(dá):對照組胰腺組織α-SMA、CO-Ⅰ、TGFβ1未見明顯表達(dá),幾乎無纖維化跡象;各模型組之間的比較僅24小時與48小時比較P>0.05,兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;余下各組之間比較均有顯著性差異,且隨著時間的延長,α-SMA 、C
6、O-Ⅰ、TGFβ1表達(dá)明顯增多、大鼠胰腺纖維化的程度加重,排序順序依次為24小時<48小時<1周<2周<3周<4周。 3.血清和胰腺組織中的SOD、MDA:對照組血清和胰腺組織中的SOD、MDA值在整個實(shí)驗(yàn)過程中無明顯變化,而模型組血清和胰腺組織SOD值在各時間點(diǎn)較對照組顯著降低,相應(yīng)的MDA值較對照組顯著升高。 結(jié)論(一): 1.每周2次腹腔內(nèi)注射10%的DDC500mg/kg能夠制造穩(wěn)定的大鼠慢性胰腺炎模型,
7、成模時間在4周時即較為典型。 2. 胰腺炎中TGF-β1表達(dá)、胰腺纖維化與氧化損傷有關(guān),氧化應(yīng)激參與了慢性胰腺炎的發(fā)病過程。 結(jié)果(二) 1. 體重的觀察:模型組大鼠則食欲欠佳,到后期更是萎靡不振。只進(jìn)食很少量的飼料,體重下降,毛發(fā)無光澤,有的大鼠有尿失禁、腹瀉等現(xiàn)象。而普羅布考處理組的大鼠體重較模型組增加,差異有顯著性(P<0.01)。 2. TGF-β1 表達(dá):與模型組相比普羅布考組胰腺組織中TGF-
8、β1 的表達(dá)量下降,胰腺組織中的膠原纖維的表達(dá)量亦顯著減少,胰腺纖維化的程度明顯改善。 3. 血清和胰腺組織中的MDA:與模型組相比普羅布考治療組血清和胰腺組織中的MDA較模型組低,差異有顯著性(P<0.01),隨著普羅布考治療劑量的增加,血清和胰腺組織中的MDA含量逐漸下降,其MDA含量排序依次為模型組(B組)>普低組(C組)>普中組(D組)>普高組(E組)>對照組(A組)。 4. 血清和胰腺組織中的SOD:與模型組相
9、比普羅布考各治療組血清和胰腺組織中的SOD較模型組高,差異有顯著性(P<0.01),隨著普羅布考治療劑量的增加,血清和胰腺組織中的SOD含量逐漸升高,其SOD含量排序依次為模型組(B組)<普低組(C組)<普中組(D組)<普高組(E組)<對照組(A組)。 5.各組胰腺組織表達(dá)TGF-β1和血清MDA呈明顯正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為:模型組(B組)=0.860,P < 0.01;普低組(C組)=0.791,P < 0.05;普中組(D
10、組)=0.836,P < 0.05;普高組(E組)=0.861,P < 0.01。 6.除普低組(C組)外其余各組胰腺組織表達(dá)TGF-β1和胰腺組織MDA呈明顯正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為:模型組(B組)=0.718,P < 0.05;普低組(C組)=0.689,P > 0.05;普中組(D組)=0.861,P < 0.01;普高組(E組)=0.750,P < 0.05。 7. 各組胰腺組織表達(dá)TGFβ1表達(dá)和血清SOD呈明
11、顯負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為:模型組(B組)=-0.804,P < 0.05;普低組(C組)=-0.819,P < 0.05;普中組(D組)=-0.805,P < 0.05;普高組(E組)=-0.837,P < 0.01。 8. 除普低組(C組)外其余各組胰腺組織表達(dá)TGFβ1表達(dá)和胰腺SOD呈明顯負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為:模型組(B組)=-0.737,P < 0.05;普低組(C組)=-0.687,P > 0.05;普中組(D組
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